Page 47 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第9期 李 昊，张林凯，张 晶. 凋亡抑制蛋白c⁃FLIP（L）调控肺纤维化过程的机制［J］.
2021年9月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（09）：1310-1314，1341 ·1313 ·

A B
E⁃cadherin c⁃FLIP
（ % ） *
60
对照组 E⁃cadherin阳性率 80 0
40
20

（ % ） 50 对照组 BLM组
*
40
BLM组 c⁃FLIP阳性率 30
20
10
0
对照组 BLM组
A：免疫组化染色观察E⁃Cadherin和c⁃FLIP（L）的表达分布（×100）；B：采用Image⁃J软件对E⁃Cadherin和c⁃FLIPL染色进行定量分析。两组
比较，P < 0.01(n=3）。
*
图2 免疫组化染色观察E⁃Cadherin及c⁃FLIP的表达分布
Figure 2 Expression and distribution of E⁃Cadherin and c⁃FLIP observed by immunohistochemical staining

A B
c⁃FLIP⁃A549 c⁃FLIP⁃A549
对照组 #1 #2 对照组 #1 #2
c⁃FLIP（L） —55 kDa

β⁃actin —43 kDa

C 0.001 5 ** 对照组 *
mRNA相对表达水平 0.001 0 ** c⁃FLIP⁃A549#1 mRNA Vimentin 相对表达水平 0.5
0.4
c⁃FLIP⁃A549#2
0.3
0.2
0.000 5
0.1
0.000 0
0.0
对照组 #1
#2
N⁃cadherin
E⁃cadherin
c⁃FLIP⁃A549
A：c⁃FLIP⁃A549稳定表达株的细胞形态学观察（×400）；B：Western blot验证各稳定株中c⁃FLIP（L）蛋白的表达水平；C：qPCR检测各稳定株
中E⁃cadherin、N⁃cadherin和Vimentin mRNA表达水平的变化，两组比较，P < 0.05，P < 0.001（n=3）。
**
*
图3 c⁃FLIP（L）高表达能促进细胞发生EMT现象
Figure 3 Overexpresion of c⁃FLIP（L）promotes EMT⁃like phenotype
表达，结果显示FLIP⁃2 siRNA 干扰片段能有效敲减 阻滞EMT的进程。
内源性 c⁃FLIP（L）的表达水平（图 5A）。接着，采
3 讨 论
用 FLIP⁃2 siRNA 转染 A549 细胞培养 24 h 后，加入
20 ng/mL TGF⁃β1 诱导细胞 EMT 发生，Western blot 越来越多的数据表明，在肺纤维化发展中，EMT
［2］
检测EMT 标志蛋白表达变化。对照组NC siRNA中 是成纤维细胞/肌成纤维细胞的一个重要来源 。来
TGF⁃β1诱导的E⁃cadherin表达显著下调及Vimentin 源于肺组织的上皮细胞进行体外培养时，在促纤维化
［10］
表达水平上升（P < 0.001，n=3，图 5B），而 FLIP⁃2 因子TGF⁃β1的诱导下能够转化成间质细胞 。肺纤
siRNA 有效抑制了 TGF⁃β1 诱导的 EMT 现象，抑制 维化组织中TGF⁃β1高表达不仅能促进EMT发生，还

了 E⁃cadherin 蛋白水平的下调，也减弱了 Vimentin 能促进成纤维细胞过度增殖和分化，因此，TGF⁃β1是
表达水平的上调，说明下调 c⁃FLIP（L）表达水平能 肺纤维化发生的关键因子。另有研究表明，炎性因子