Page 48 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第9期
·1314 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年9月

［11］
0.6 TGF⁃β1（-） TNF⁃α能够促进TGF⁃β1诱导的EMT发展 ，但其作
*
TGF⁃β1（+） 用机制并不清楚。本研究发现c⁃FLIP（L）能够促进
luciferase相对活性 0.4 靶基因，能被TNF⁃α诱导上调，这一发现为TNF⁃α促
TGF⁃β1 诱导的 EMT 发生，而 c⁃FLIP（L）是 NF⁃κB 的

TGF⁃β1 诱导 EMT 发生提供了可能的分子机制。肺
0.2
纤维化发展的早期是肺泡炎症，肺部浸润细胞和间质
细胞分泌的主要细胞因子是TNF⁃α，在IPF患者的肺
组织中检测到c⁃FLIP（L）蛋白的异常表达 ［4-5］ ，综合这
0.0
对照组 c⁃FLIP⁃A549组
些报道，推测在肺纤维化过程中 c⁃FLIP 高表达与
c⁃FLIP⁃A549稳定株及对照株细胞进行报告基因质粒转染24 h
EMT发生密切相关，是调控肺纤维化发展的重要诱
后，采用 TGF⁃β1（10 ng/mL）刺激 12 h 收集样品，检测 luciferase 酶活
性。两组比较，P < 0.05（n=3）。 因之一。
*
图4 c⁃FLIP（L）过表达增强TGF⁃β1诱导Smad通路的激活 虽然C⁃FLIP（L）是重要的一种抗凋亡蛋白，但具
Figure 4 c ⁃ FLIP（L） enhances the activation of Smad 有多种生物学功能。我们前期研究报道了c⁃FLIP（L）
pathway induced by TGF⁃β1 能够进入细胞核参与 AP⁃1 转录活性调控 ［13］ 。而文

A siRNA
NC FLIP⁃1 FLIP⁃2
c⁃FLIP —55 kDa

β⁃actin —43 kDa

B
NC siRNA FLIP⁃2 siRNA -TGF⁃ β1（-） ** -TGF⁃ β1（-）
E⁃cadherin/β⁃actin 蛋白相对表达水平 Vimentin/β⁃actin 蛋白相对表达水平
0 24 h 0 24 h 0.8 +TGF⁃ β1（+） 0.8 +TGF⁃ β1（+）
E⁃cadherin —135 kDa 0.6 ** 0.6 *
Vimentin —58 kDa 0.4 0.4
β⁃actin —43 kDa 0.2 0.2
si⁃NC si⁃FLIP si⁃NC si⁃FLIP
A：A549细胞分别转染siRNA后培养48 h，Western blot检测c⁃FLIP（L）的表达水平；B：A549细胞转染siRNA后培养24 h，然后采用TGF⁃β1
（20 ng/mL）诱导24 h，检测E⁃cadherin及Vimentin的蛋白表达变化，并灰度扫描进行定量分析，两组比较，P < 0.01，P < 0.001（n=3）。
*
**
图5 敲减c⁃FLIP（L）能够阻滞TGF⁃β1诱导的EMT发生
Figure 5 Knockdown of c⁃FLIP（L）inhibits the process of EMT induced by TGF⁃β1

献报道AP⁃1家庭成员c⁃Jun可以导致上皮细胞极性 提出了肺纤维化中 c⁃FLIP（L）的异常表达可能是
缺失，c⁃Fos 可降低细胞间的粘连，JunD 活性影响 IPF 治疗的潜在靶点，从新的角度探究肺纤维化的
MMP 表达，这些都与 EMT 关系密切 ［14］ 。此外，我们 发病机制，靶向EMT调控为缓解肺纤维化疾病进展
还发现c⁃FLIP（L）能进入胞核参与catenin/TCF 转录 提供新的可能途径。
复合物调控β⁃catenin下游靶基因的表达 ［15］ ，而TGF⁃
［参考文献］
β1 信号能激活 Wnt/catenin 通路与 Smad 通路产生
［1］ YOO H，JEONG B H，CHUNG M J，et al. Risk factors and
crosstalk促进EMT转化 ［16］ 。这些发现都为c⁃FLIP参
clinical characteristics of lung cancer in idiopathic pulmo⁃
与EMT发生提供了有力依据。
nary fibrosis：a retrospective cohort study［J］. BMC Pulm
在BLM诱导的小鼠肺纤维化模型中，肺组织切
Med，2019，19（1）：149
片的免疫组化分析显示 c⁃FLIP（L）高表达与 E⁃cad⁃
［2］ TZOUVELEKIS A，GOMATOU G，BOUROS E，et al.
herin 低表达呈负相关，提示 c⁃FLIP（L）参与了肺纤
Common pathogenic mechanisms between idiopathic pul⁃
维化过程中的EMT发生。在细胞水平，进一步实验 monary fibrosis and lung cancer［J］. Chest，2019，156
证明 c⁃FLIP（L）高表达能够增强 TGF⁃β1 诱导的 （2）：383-391
EMT进程。尽管c⁃FLIP（L）调控EMT的作用机制以 ［3］ KANEMARU R，TAKAHASHI F，KATO M，et al. Dasat⁃
及参与肺纤维化的作用机制还有待阐明，但本研究 （下转第1341页）