Page 68 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第9期
·1334 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年9月

3 A
cp⁃Ti 15
cp⁃Ti⁃col cp⁃Ti
* （ Ug/gprot） 10 cp⁃Ti⁃col *
nm ） 2 * *
（ 450 ALP活性 5
D
1 **
0
7 d 14 d
B cp⁃Ti cp⁃Ti⁃col
0
1 d 3 d 6 d
两组比较，P < 0.05，P < 0.01（n=4）。
**
*
图5 两组试件表面培养MC3T3⁃E1细胞1、3、6 d的CCK⁃8 d 7
检测结果
Figure 5 The results of CCK⁃8 assay for MC3T3⁃E1 cells
cultured on two substrates after 1，3 and 6 days

d
化进行了研究。成骨细胞在增殖后开始分化，产生 14
细胞外基质，基质矿化成熟后形成骨组织。在此过
［18］
程中，ALP活性与成骨细胞的分化程度密切相关 。 A：微板法检测，两组比较，*P < 0.001（n=3）。B：染色法检测。
在本研究中，胶原蛋白涂层改性钛表面的成骨细胞具 图 6 两组试件表面培养 MC3T3⁃E1 细胞 7 d、14 d 的 ALP
有更强的ALP活性，因而随着细胞黏附定植时间的延 活性检测结果
长，表现出更显著的成骨分化。 Figure 6 The results of ALP activity assay for MC3T3⁃E1
Runx2 是骨形成过程中的一种关键转录因子， cells cultured on two substrates after 7 and 14
days
在成骨细胞的早期分化中起促进作用 ［19］ 。OSX 特
异性表达于发育的骨组织中，能诱导前成骨细胞分化 胶原蛋白肽键之间存在离子键、范德华力以及
［20］
为成熟的成骨细胞 。OCN是骨基质矿化过程中由 非极性基团产生的疏水键作用力，在其自组装形成
成骨细胞形成的非胶原蛋白，是成骨活动和骨转换的 凝胶到紫外线照射干燥的过程中，通过物理吸附稳
重要标志。Runx2、OSX和OCN的蛋白表达水平能够 定存在于钛表面，进而在钛表面形成胶原蛋白涂
反映成骨细胞的分化情况。在本研究中，相对于光滑 层。Hong等 ［21］ 研究发现，在钙磷涂层表面物理吸附
钛表面，胶原蛋白涂层改性钛表面培养成骨细胞7 d 胶原蛋白条件下，MG⁃63 细胞的黏附能力无明显提
和14 d后均显示成骨相关蛋白（Runx2、OSX和OCN） 高，但细胞增殖和成骨分化能力显著增强。同时，
表达水平显著提高，表现出更强的成骨分化能力。该 对比分析了物理吸附法和仿生共沉积法固定胶原
结果与ALP活性检测结果相一致。 蛋白对 MG⁃63 细胞黏附、增殖和成骨分化的影响，

A B C
7 d 14 d cp⁃Ti cp⁃Ti
cp⁃Ti cp⁃Ti⁃col cp⁃Ti cp⁃Ti⁃col cp⁃Ti⁃col cp⁃Ti⁃col
2.0 * * 2.0
Runx2 55-62 kDa * * *
蛋白相对表达水平 1.0 蛋白相对表达水平 1.0
OSX 46 kDa 1.5 1.5 *
OCN 11 kDa
GAPDH 36 kDa 0.5 0.5

0 0
Runx2 OSX OCN Runx2 OSX OCN
A：Western blot 检测蛋白表达；B：培养 7 d 的成骨相关蛋白表达的定量分析；C：培养 14 d 的成骨相关蛋白表达的定量分析。两组比较，
P < 0.05（n=3）。
*
图7 两组试件表面培养MC3T3⁃E1细胞7 d、14 d的成骨相关蛋白（Runx2、OSX、OCN）表达
Figure 7 Osteogenic⁃related protein expressions of Runx2，OSX and OCN in MC3T3⁃E1 cells cultured on two substrates af⁃
ter 7 and 14 days