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第42卷第1期 刘 苏，徐巍龙，查 敏，等. miR⁃296⁃5p在糖尿病肾病db/db小鼠血浆外泌体中的表达及功能［J］.
2022年1月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（01）：014-022 · 17 ·

1，db/db组小鼠的染色面积与db/m组小鼠的染色面
2 结 果
积的比值即为该指标的相对表达量。
1.3 统计学方法 2.1 小鼠代谢及生化指标比较
数据分析采用 GraphPad Prism 5 软件，计量资 与db/m组比较，db/db组小鼠24 h尿蛋白定量、
料采用均数±标准差（x ± s）表示，两组间比较采用 血尿素、血肌酐、血胱抑素 C、空腹血糖、体重均升
student⁃t 检验；计数资料采用频数和百分比（%）表 高，其中 Upro、FBG、体重升高显著（P=0.003，P <
示，两组间比较采用χ 检验。P < 0.05 为差异有统 0.001，P＝0.020），符合 2 型糖尿病肾病小鼠临床表
2
计学意义。 现（表2）。

表2 小鼠尿蛋白、肾功能、血糖及体重比较
Table 2 Comparison of urine protein，renal function，blood glucose and weight in mice （x ± s，n=6）

组别 Upro（mg/24 h） BUN（mmol/L） Scr（μmol/L） Cys⁃C（mg/L） FBG（mmol/L） 体重（g）
db/m组 1.61 ± 0.32 14.80 ± 0.56 17.43 ± 5.83 0.62 ± 0.14 9.29 ± 1.13 27.23 ± 1.97
db/db组 5.11 ± 0.88 18.73 ± 4.92 24.60 ± 15.85 0.68 ± 0.25 > 33.33 44.80 ± 10.00
P值 0.003 0.240 0.500 0.740 < 0.001 0.020

2.2 小鼠血浆外泌体鉴定 2.3 小鼠血浆外泌体miRNA测序分析及验证
电镜视野下，两组小鼠血浆均可见少量外泌体 db/m 组、db/db 组小鼠血浆外泌体行 miRNA 测
样结构（图 1）。NTA 结果显示，db/m 组小鼠血浆外 序，通过TargetScan、MiRanda软件，并集筛选出32个
泌体的颗粒检测浓度为 6.4×10 个/mL，平均粒径 靶向Snail1的差异miRNA，其中17个miRNA表达上
7
132.1 nm；db/db组小鼠血浆外泌体的颗粒检测浓度 调，15个miRNA表达下调（表3）。
7.7×10 个/mL，平均粒径 126.8 nm，均符合外泌体分 按照|log2FC|值由高到低顺序，利用小鼠肾组
7
布范围，两组血浆外泌体粒径比较，差异无统计学 织行 RT⁃qPCR 验证，优先检测 TargetScan、MiRan⁃
意义（P=0.890）。 da 软件中重复的 miRNA。结果显示，与 db/m 组

电镜（×67 000） 布朗运动图 粒径分布图

5
（ ×10 6 个/mL ） 4 3

db/m组 2

颗粒数 1

0
0 100 200 300 400 500 600 700
直径（nm）
100 nm
5
（ ×10 6 个/mL ） 4 3

db/db组 2
颗粒数 1

0
0 100 200 300 400 500 600
100 nm 直径（nm）
图1 透视电镜及NTA技术鉴定小鼠血浆外泌体
Figure 1 Characterization of mouse plasma exosomes by transmission electron microscope and NTA