Page 25 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第1期 刘 苏，徐巍龙，查 敏，等. miR⁃296⁃5p在糖尿病肾病db/db小鼠血浆外泌体中的表达及功能［J］.
2022年1月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（01）：014-022 · 19 ·

3 db/m 8 db/m
db/db db/db

相对表达量 2 * 相对表达量 6 4

1
2
**
0
0
miR⁃7030⁃5p
miR⁃615⁃5p
miR⁃7074⁃5p
miR⁃let⁃7g⁃3p
miR⁃1961
miR⁃221⁃5p
miR⁃30e⁃5p
miR⁃200c⁃3p
miR⁃370⁃3p miR⁃7069⁃5p miR⁃296⁃5p miR⁃30b⁃5p miR⁃30c⁃5p miR⁃3094⁃3p miR⁃449a⁃5p miR⁃7669⁃3p miR⁃7220⁃3p miR⁃3061⁃3p
miR⁃34a⁃5p
与db/m组相比，P < 0.05，P < 0.01（n＝6）。
*
**
图2 RT⁃qPCR验证小鼠肾组织miRNA表达
Figure 2 Verification of miRNAs in mouse kidneys by RT⁃qPCR
2.0
db/m 组比较，荧光素酶活性强度差异有统计学意义（P=
*
db/db
0.003，图5），证明miR⁃296⁃5p靶向结合Snail1。
1.5
2.5 RT⁃qPCR检测小鼠肾组织EMT相关基因表达水平
相对表达量 1.0 * herin mRNA 表达下调（P=0.012），α⁃SMA mRNA 表
与 db/m 组相比，db/db 组小鼠肾组织中 E⁃cad⁃
达上调（P=0.042），差异有统计学意义；Snail1 mRNA
0.5
表达极度上调（P < 0.001，图 6），提示 db/db 小鼠肾
组织存在α⁃SMA阳性肌成纤维细胞增殖及Snail1介
0.0
miR⁃296⁃5p miR⁃34a⁃5p 导的EMT。
与db/m组相比，P < 0.05，P < 0.01（n=6）。
**
*
2.6 小鼠肾组织病理切片的观察
图3 RT⁃qPCR验证小鼠血浆外泌体miRNA表达
Figure 3 Verification of miRNAs in mouse plasma Masson染色见db/m组小鼠肾小球大小正常，无
exsomes by RT⁃qPCR 肾小管扩张、萎缩，细胞外 Masson 染色阳性面积小
Predicted consequential pairing of target region（top）and Site
miRNA（bottom） type
Position 596⁃603 of SNAl1 3′ UTR 5′ ...UCCCAGAACUAUUUUGGGGCCCA...
8mer
mmu⁃miR⁃296⁃5p 3′ UGUCCUAACUCCCCCCCGGGA
图4 Snail1与miR⁃296⁃5p的结合位点序列图
Figure 4 Sequence of the binding sites of Snail1 and miR⁃296⁃5p

5 db/m
0.8 NC mimics ***
db/db
miR⁃296⁃5p mimics
*** 4
0.6 ** 3
RLU1/RLU2 0.4 相对表达量 2 *

1
*
0.2
0
E⁃cadherin α⁃SMA Snail1
0.0
与db/m组相比，P < 0.05， P < 0.001（n＝6）。
*
***
Snail1 WT Snail1 MUT
图 6 RT⁃qPCR 检测小鼠肾组织中 E⁃cadherin、α⁃SMA 及
两组比较，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。 Snail1 mRNA表达
***
**
图5 双荧光素酶检测结果 Figure 6 The mRNA expression of E⁃cadherin，α⁃SMA
Figure 5 Results of dual luciferase assay and Snail1 in mouse kidney by RT⁃qPCR