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第42卷第1期 刘       苏，徐巍龙，查 敏，等. miR⁃296⁃5p在糖尿病肾病db/db小鼠血浆外泌体中的表达及功能［J］.
                  2022年1月                    南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（01）：014-022                        · 21  ·


                                                                  miRNA具有良好的生物稳定性。其次，外泌体由来
                3 讨    论
                                                                  源细胞主动胞吐释放到细胞外，其包裹的miRNA能
                    肾间质纤维化的主要特征是α⁃SMA 阳性肌成                        够直接反映机体的生理病理状态，在癌症                    ［15］ 、脂肪
                纤维细胞增殖和细胞外基质过度沉积，是 DN 肾功                          营养不良    ［16］ 、心血管疾病    ［17］ 等疾病中，循环外泌体
                能进行性下降的主要原因之一。目前研究显示，                             miRNA表达谱呈特异性改变，是疾病诊断的新型标
                肾小管上皮细胞 EMT 不是肌成纤维细胞的主要                           志物。本研究通过小鼠血浆外泌体 miRNA 测序及
                来源 ，而是通过诱导上皮细胞周期阻滞 、促进肌                           RT⁃qPCR 验证，发现 db/db 小鼠 miRNA 在血浆外泌
                    ［6］
                                                    ［7］
                成纤维细胞分化及维持间质炎症等方式 ，加速肾                            体中呈差异表达，其中 miR⁃296⁃5p 显著下调，可能
                                                    ［8］
                间质纤维化。因此，明确 EMT 的调控机制，对防治                         是DN潜在的生物标志物。本研究认为，miR⁃296⁃5p
                糖尿病肾病至关重要。                                        在 db/db 小鼠血浆外泌体表达下降，是在糖尿病背
                    EMT 的本质是上皮细胞向间充质细胞表型转                         景下，肾脏及肾外组织功能障碍的共同结果。首
                化的过程，在糖尿病背景下，损伤的肾小管上皮细                            先，肾脏作为DN的主要病变器官，可能释放富集差
                胞E⁃cadherin表达下调，细胞丧失黏附特性，逐渐从                      异表达 miRNA 的外泌体        ［18］ ；其次，脂肪细胞被认为
                基底膜上脱落，表达α⁃SMA 间充质细胞表型，并通                         是循环外泌体 miRNA 的主要来源             ［16］ ，在高糖背景
                过断裂的肾小管基底膜移行到肾间质中。本研究                             下，包括肾脏、脂肪在内的胰岛素敏感组织均可出
                中，12 周龄 db/db 小鼠肾组织病理见间质炎症细胞                      现功能障碍，血浆外泌体miR⁃296⁃5p的来源细胞有
                浸润，Masson 染色阳性；肾组织α⁃SMA 基因表达增                     待后续研究进一步明确。
                加，蛋白表达有上升趋势，符合早期DN肾小管间质                               目前血浆外泌体 miRNA 的研究多围绕疾病诊
                纤维化改变。与此同时，肾组织 E⁃cadherin 基因和                     断及病情评估，其靶向调节功能的相关研究甚少，
                蛋白下调显著，提示在 DN 肾小管间质病变早期即                          血浆外泌体可通过直接融合胞膜或内陷胞吞、水平
                存在上皮细胞EMT，EMT与间质炎症及肌成纤维细                          转移 miRNA 等进入靶细胞，调控靶细胞基因。本
                胞增殖相关。本研究免疫组化检测未见α⁃SMA 蛋                          研究 miR⁃296⁃5p 在 db/db 小鼠肾组织中表达下调，
                白显著上升，可能和造模时间短、肾间质病变早期                            与血浆外泌体中表达一致，双荧光素酶检测提示，
                纤维化程度不严重有关。                                       miR⁃296⁃5p与Snail1存在靶向关系，因此，本研究提
                    E⁃cadherin 表达减少或缺失是 EMT 的标志，受                 出，表达下调的miR⁃296⁃5p可能通过血浆外泌体递
                到转录因子Snail1的调节 。在肾脏上皮细胞正常                         送，靶向上调肾小管上皮细胞Snail1，诱导肾小管上
                                      ［9］
                分化过程中，低表达的 Snail1 可维持肾组织结构及                       皮细胞EMT，加速DN肾间质纤维化。
                内环境稳态；而病理状态下，升高的Snail1与E⁃cad⁃                         综上所述，miR⁃296⁃5p在DN db/db 小鼠血浆外
                herin 启动子的 E2⁃box 特异性结合，抑制 E⁃cadherin             泌体中表达显著下降，是 DN 的潜在生物标志物之
                基因的转录，下调 E⁃cadherin 表达，触发上皮细胞                     一。同时，本研究在动物实验水平提出，表达下调
                    ［10］
                EMT   。既往文献报道，Snail1 在糖尿病肾病、IgA                   的miR⁃296⁃5p可能通过血浆外泌体递送，靶向上调
                肾病、微小病变肾病等多种肾脏疾病中均可升高，                            肾小管上皮细胞Snail1，诱导肾小管上皮细胞EMT，
                而在DN时升高显著         ［11］ 。肾纤维化小鼠模型       ［12］ 及肾    加速 DN 肾间质纤维化，但仍需通过细胞实验及药
                小管上皮细胞 EMT 模型          ［13］ 进一步证实，升高的             物干预实验等进一步验证。

                Snail1 可诱导肾小管上皮细胞 EMT。本研究 db/db                  ［参考文献］
                小鼠肾组织 Snail1 基因及蛋白表达显著增加，而
                                                                 ［1］ MENON M C，ROSS M J. Epithelial⁃to⁃mesenchymal tran⁃
                E⁃cadherin 降低明显，结合文献资料，本研究提
                                                                       sition of tubular epithelial cells in renal fibrosis：a new
                出，DN 时，肾组织局部 Snail1 表达增加，通过下调
                                                                       twist on an old tale［J］. Kidney Int，2016，89（2）：263-266
                E⁃cadherin，诱导了肾小管上皮细胞EMT。
                                                                 ［2］ ZHAO Y，YIN Z，LI H，et al. MiR⁃30c protects diabetic
                    Snail1又受到多种miRNA的靶向调控            ［2，14］ ，而血
                                                                       nephropathy by suppressing epithelial ⁃ to ⁃ mesenchymal
                浆或血清中的 miRNA 发挥调控功能需要外泌体介                              transition in db/db mice［J］. Aging Cell，2017，16（2）：
                导。首先，外泌体是循环 miRNA 的主要存在形式，                             387-400
                其特殊的脂质双层膜结构将 miRNA 与外界核酸酶                        ［3］ WONG G L，ABU JALBOUSH S，LO H W. Exosomal mi⁃
                相隔绝，相比血循环中游离的 miRNA，外泌体中的                              croRNAs and organotropism in breast cancer metastasis
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