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第42卷第5期 俞 灏，周子皓，张南南，等. Bmal1调控T型钙离子通道对慢性心衰室性心律失常昼夜节律的影响［J］.
2022年5月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（05）：611-618 ·613 ·
1.2.7 染色质免疫共沉淀技术（chromatin immuno⁃ 表1 对照组与心衰组小鼠心超数据及心衰参数比较
precipitation，ChIP） Table 1 Data comparison of echocardiography and heart
根据研究报道，Bmal1 作为转录因子可结合到 failure between CON group and CHF group
（x ± s）
目的基因的启动子 E⁃box 区域发挥调控作用 。本
［5］
指标 CON组（n=12） CHF组（n=12）
文通过生物信息学检索α1G、α1H启动子上游E⁃box 心率（次/min） 512.44 ± 35.13 504.04 ± 44.14
结合位点，使用ChIP检测观察Bmal1与α1G、α1H启 左室射血分数（%） 067.49 ± 4.87 051.27 ± 8.04 *
动子的 E⁃box 区域结合情况。超声破碎细胞，加入 左室质量（mg） 106.84 ± 9.03 203.28 ± 50.08 *
Bmal1 抗体，与靶蛋白⁃DNA 复合物相互结合，加入 左室缩短分数（%） 044.77 ± 4.33 025.37 ± 6.01 *
ProteinA，结合抗体⁃靶蛋白⁃DNA 复合物，沉淀，洗 左室收缩末内径（mm） 001.82 ± 0.18 002.95 ± 0.58 *
脱，得到富集的靶蛋白⁃DNA 复合物，解交联，纯化 左室舒张末内径（mm） 003.30 ± 0.12 003.92 ± 0.51 *
左室后壁厚度（mm） 001.34 ± 0.08 001.33 ± 0.16
富集的DNA⁃片断，荧光定量PCR分析。
左室间隔厚度（mm） 000.88 ± 0.07 001.25 ± 0.17 *
1.3 统计学方法
ANP（mRNA相对表达量） 001.00 ± 0.04 003.64 ± 0.19 *
实验数据用均采用均数±标准差（x ± s）或百分
BNP（mRNA相对表达量） 001.00 ± 0.06 004.07 ± 0.17 *
比表示，用 GraphPad Prism 8 软件进行统计学分析，
与CON组比较，P < 0.05。
*
计量资料结果之间分析使用 t 检验，计数资料结果
CON CHF
之间分析使用卡方检验，通过 R statistical package
（版本2.12.1）计算，使用JTK⁃cycle 分析评估Bmal1、
α1G、α1H节律性特征，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
图1 CON组与CHF组小鼠代表性的超声心动图图片
2.1 CHF 小鼠心脏收缩功能降低伴心肌肥厚及纤 Figure 1 Representative echocardiography results in
维化
CON group and CHF group
与假手术对照组（CON）相比，CHF 组小鼠左室
射血分数及左室缩短分数均明显降低，左室收缩末 1G，α1H）行IHC及Western blot检测（图3）。与CON
及舒张末内径明显扩张，具有统计学差异（P＜0.05， 组相比，CHF组α1G及α1H染色阳性面积明显增加，
表1），且PCR检测心肌组织内心房钠尿肽（atrial na⁃ 蛋白表达水平显著增高。结果提示，在CON组小鼠
triuretic peptide，ANP），脑钠肽（brain natriuretic pep⁃ 心肌中，TTCC 表达量很低，CHF 小鼠心肌中，TTCC
tide，BNP）明显升高（P＜0.05，表 1），提示 CHF 组小 表达明显增高。
鼠心脏收缩功能明显降低。图1为两组小鼠代表性 2.3 CHF 小鼠 VA 发作率明显增高与 TTCC 表达增
心超图片。同时，CHF组小鼠左室间隔部厚度及左室 高有关
质量均明显增加（P＜0.05，表 1），心肌细胞横断面 分别在 CT0 和 CT12 时间点对小鼠心脏进行离
（cross⁃sectional area，CSA）HE 染色提示 CHF 组心肌 体电刺激诱发 VA。标准刺激程序和 VA 发作的典
细胞明显增大（P＜0.05，图2B），提示CHF组小鼠心肌 型图片见图4A。在CT0时间点行PES，CON 组诱发
肥厚。上述结果表明，与CON组相比，CHF组小鼠心脏 出1例心室颤动，VA发生率为10%；CHF组诱发出2
收缩功能明显下降并伴有心肌肥厚。 例室性心动过速，5 例心室颤动，2 例同时诱发出室
与CON组相比，Masson染色提示CHF组小鼠心 性心动过速和心室颤动，VA 发生率为 90%；CHF+
脏纤维组织明显增多（P＜0.05，图 2C）。α⁃SMA 和 MIB 组诱发出3例心室颤动，VA发生率为30%。在
Gal⁃3 是与心脏纤维化密切相关的分子蛋白。IHC CT12时间点行PES，CON组未诱发出VA；CHF组诱
染色显示，与CON组相比，α⁃SMA及Gal⁃3在CHF组 发出1例心室颤动，3例同时诱发出室性心动过速和
小鼠心脏中表达明显升高（P＜0.05，图2D~E），表明 心室颤动，VA发生率为40%；CHF+MIB组诱发出2例
CHF 组小鼠心肌纤维化显著增多。图 2A 为心脏切 心室颤动，CHF+MIB 组 VA 发生率为 20%。以上结
片染色代表性图片。 果提示，CHF 组小鼠在上述两个时间点的 VA 发生
2.2 CHF小鼠心脏中TTCC表达量增高 率均明显高于CON组（P＜0.05，图4B）。使用TTCC
对 CON 及 CHF 组小鼠心肌两种 TTCC 亚型（α 阻滞剂米贝拉地尔（MIB）后，和CHF小鼠相比，治疗
