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第42卷第5期 俞 灏，周子皓，张南南，等. Bmal1调控T型钙离子通道对慢性心衰室性心律失常昼夜节律的影响［J］.
                  2022年5月                     南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（05）：611-618                       ·617 ·


               （LTCC）和T型Ca 通道（TTCC） 。TTCC只有α1一                        本研究的不足之处在于未能深入探究TTCC激
                                           ［10］
                               2+
                种亚基，包括 Cav3.1（α1G），Cav3.2（α1H），Cav3.3（α           活后生物钟基因与胞浆钙浓度变化的关联。在心
                1I）3 种亚型，其中心肌中仅表达 Cav3.1（α1G）和                    脏，L 型 Ca 通道含量丰富，负责大部分 Ca 进入细
                                                                                                        2+
                                                                            2+
                           ［22］
                Cav3.2（α1H） 。在大多数哺乳动物胚胎期心脏中，                      胞，是心肌细胞以钙释钙触发心肌收缩的主要钙离
                TTCC 在心房和心室肌细胞中明显表达，但出生后                          子通道，所以 TTCC 引起细胞内钙超载的作用大小
                在心室肌细胞中表达量逐渐减少或不表达，仅在窦                            仍需进一步研究。本实验研究中的动物为心肌肥
                房结及传导系统中表达，参与心脏IV期的自动去极                           厚伴心功能不全的模型，而早期心衰和失代偿期心
                化 ［11］ 。然而，在许多病理条件下如心肌肥厚或者心                       衰的调控机制并不完全一致。生物钟基因在早期
                力衰竭时，TTCC 会再次重新表达，但其机制尚未阐                         和晚期心衰中表达是否一致及调控机制目前仍未
                释清楚   ［12-13］ 。在本实验中，TAC诱导的心衰小鼠中，                 阐释清楚。此外，TTCC 特异性抑制剂米贝拉地尔
                免疫组化及 Western blot 结果提示α1G 和α1H 两种                因存在严重的药物相互作用并未在临床中推广使
                                                                                                            +   +
                亚型表达水平较对照组（CON）明显升高，提示 CHF                        用。有研究报道，恩格列净可通过抑制心脏Na /H
                小鼠心脏中TTCC重新高表达，同时VA发生率明显                          交换降低心肌细胞胞质Ca 浓度，然而这类钠⁃葡萄
                                                                                          2+
                增加。在 CHF 小鼠使用 TTCC 阻滞剂米贝拉地尔                       糖共转运蛋白 2（SGLT⁃2）抑制剂是否能够抑制
               （MIB）后，VA 发生率明显下降。有研究报道，在病                         TTCC尚未有研究报道，仍需进一步探讨 。
                                                                                                     ［27］
                变心肌中 TTCC 重新高表达将增加心肌细胞内 Ca                   2+       综上所述，本研究发现在 CHF 手术小鼠中，
                内流，导致细胞内Ca 超载和心律失常                ［14，23］ 。同时，    TTCC 通道重新高表达且呈昼夜节律性，使用 TTCC
                                  2+
                也有研究发现，α1H在钙调磷酸酶/核因子病理性激                          阻滞剂可减少 CHF 小鼠 VA/SCD 的发作，且 TTCC
                活的 T 细胞信号的诱导中发挥关键作用，这也会增                          这一变化受生物钟基因Bmal1直接调控。
                加心律失常的易感性          ［24-25］ 。Kinoshita 等 ［14］ 研究中，  ［参考文献］
                TTCC 阻滞剂可通过复极静息膜电位及改善心脏自
                                                                 ［1］ ROSSIGNOL P，HERNANDEZ A F，SOLOMON S D，et
                主神经的平衡发挥抗心律失常作用。以上结果提
                                                                       al. Heart failure drug treatment［J］. Lancet，2019，393
                示心衰中，VA 发生增加与 TTCC 重新高表达有关。
                                                                      （10175）：1034-1044
                收集48 h CHF小鼠心脏组织行Western blot 及qRT⁃              ［2］ TROMP J，TAY W T，OUWERKERK W，et al. Multimor⁃
                PCR，发现心脏内源性 Bmal1 的表达依旧保留生物                            bidity in patients with heart failure from 11 Asian regions：
                节律，TTCC 亦存在昼夜节律，且在 CT0 表达量最                            a prospective cohort study using the ASIAN⁃HF registry
                高。因此，发现在心衰中，Bmal1可调控TTCC使其昼                           ［J］. PLoS Med，2018，15（3）：e1002541
                夜节律性表达，这与VA/SCD发作的昼夜节律相关。                        ［3］ SAOUR B，SMITH B，YANCY C W. Heart failure and sud⁃
                                                                       den cardiac death［J］. Card Electrophysiol Clin，2017，9
                    本课题组既往研究显示心脏内源性生物钟可
                                                                      （4）：709-723
                直接调控β1⁃肾上腺素能受体（β1⁃AR），在心脏中完
                                                                 ［4］ BLACK N，D’SOUZA A，WANG Y，et al. Circadian
                整的 Clock⁃Bmal1 二聚体结构可通过与β1⁃AR 的编
                                                                       rhythm of cardiac electrophysiology，arrhythmogenesis，
                码基因Adrb1启动子上游区域的E⁃box结合，直接调                            and the underlying mechanisms［J］. Heart rhythm，2019，
                控β1⁃AR 的表达     ［26］ 。所以，进一步验证 Bmal1 作为                 16（2）：298-307
                转录因子是否可以调控 TTCC 转录。ChIP 结果显                      ［5］ XIONG W，LI J，ZHANG E，et al. BMAL1 regulates tran⁃

                示，Bmal1 可以直接结合至 TTCC 启动子区域的 E⁃                         scription initiation and activates circadian clock gene ex⁃
                box 位点，调控其转录，从而 TTCC 通道表达存在昼                           pression in mammals［J］. Biochem Biophys Res Commun，
                夜节律。本研究发现，当CHF时，TTCC通道重新高                              2016，473（4）：1019-1025
                表达，通道开放将增加舒张期钙渗漏，导致细胞内                           ［6］ TAKEDA N，MAEMURA K. The role of clock genes and
                                                                       circadian rhythm in the development of cardiovascular
                钙 超 载 ，触 发 VA/SCD，这 一 变 化 受 生 物 钟 基 因
                                                                       diseases［J］. Cell Mol Life Sci，2015，72（17）：3225-3234
                Bmal1 直接调控从而使 VA/SCD 发作有昼夜节律现
                                                                 ［7］ SCHRODER E A，LEFTA M，ZHANG X，et al. The car⁃
                象。事实上，在人类和小鼠研究中发现，存在多个
                                                                       diomyocyte molecular clock，regulation of Scn5a，and ar⁃
                与 VA 有 关 且 呈 节 律 性 表 达 的 基 因 ，如 Calm2、                 rhythmia susceptibility［J］. Am J Physiol Cell Physiol，
                Kcnh2、Scn5a、Cx43、Cx45 等  ［21］ 。所以 VA 发作的昼              2013，304（10）：C954-965
                夜时间差异很可能是由多个基因变化共同导致。                            ［8］ SCHRODER E A，BURGESS D E，ZHANG X，et al. The
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