Page 20 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第5期
·616 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年5月

A CT 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44
α1G 262 kDa
α1H 259 kDa

78 kDa
Bmal1
GAPDH 37 kDa
B 4 C 6 D 3
α1G蛋白相对表达水平 3 2 1 α1H蛋白相对表达量 4 2 Bmal1蛋白相对表达量 2 1

0
0
0
CT 0 4 8 1216 202428 32364044 CT 0 4 8 1216 202428 32364044 CT 0 4 8 1216 202428 32364044
E 10 8 F 15 G 8
α1G mRNA相对表达量 6 4 2 α1H mRNA相对表达量 10 5 mRNA相对表达量 6 4 2

0
0
0
CT 0 4 8 1216 202428 32364044 CT 0 4 8 1216 202428 32364044 Bmal1 CT 0 4 8 1216 202428 32364044
A：Western blot蛋白条带典型图片；B~D：分别为α1G、α1H及Bmal1蛋白灰度值定量分析，JKT cycle分析提示蛋白表达有节律性（所有P＜
0.05）；E~F：分别为α1G、α1H及Bmal1的mRNA表达定量分析，JKT cycle分析提示mRNA表达有节律性（所有P＜0.05）。每组n=3。
图5 CHF小鼠心肌组织TTCC（α1G、α1H）及Bmal1表达具有昼夜节律性
Figure 5 Expression of TTCC（α1G，α1H）and Bmal1 in myocardium of CHF mice showed circadian rhythm

A CACNA1G E⁃box B Anti⁃Bmal1 C Anti⁃Bmal1
ATG
promoter GATGTG * *
（ % ） 20 * （ % ） 20 *
-1 924 -1 919
富集指数 10 富集指数 10
CACNA1G E⁃box ATG
promoter GACTTG IgG IgG
0 0
-1 868 -1 863 PP PN α1G PP PN α1G PP PN α1H PP PN α1H
A：α1G和α1H启动子上游E⁃box结合位点示意图，黑色标注为E⁃box位点，箭头标注为转录起始位点；B、C：Bmal1与启动子区域结合富集
指数统计图，IgG为阴性对照，排除启动子区域的非特异性结合，PP：Bmal1结合在PERl启动子上游的E⁃box位点，为阳性参照组，PN：PERl启
动子上游区域Bmal1非结合位点，为阴性参照组，α1G：启动子-1 919 bp附近区域，Bmal1可能结合的E⁃box位点，α1H：启动子-1 863 bp附近区
域，Bmal1可能结合的E⁃box位点。与PN比较，P < 0.05（n=4）。
*
图6 染色质免疫共沉淀技术检测Bmal1与T型钙离子通道两种亚型（α1G和α1H）启动子区域的结合情况
Figure 6 The bindings of Bmal1 to promoter regions of TTCC（α1G and α1H）detected by chromatin immunoprecipitation

VA 发生率明显增加，这与之前研究结果相符。目 一。在本研究中，发现在 CHF 小鼠心脏中 Bmal1 及
前研究报道，CHF患者VA/SCD更常发生在清晨，具 TTCC 表达在 48 h 内有昼夜节律性，蛋白表达水平
有晨峰现象 ［17-18］ ，且越来越多的证据表明这些心血 在CT0时出现第一个峰值，于是在CT0及其相对应的
管不良事件的昼夜节律性至少部分与内源性生物 CT12两个时间点对小鼠心脏行离体程序性电刺激，
钟对离子通道的调控有关 ［4，9，19］ 。在 Jeyaraj 等 ［20］ 的 发现在CHF小鼠中，CT0时间点VA的发生率明显高
研究中，转录调节因子 Klf15 基因缺失或过表达都 于CT12，表明心脏内源性生物钟参与了VA的发生。
可导致心脏复极异常，增强心脏 VA 发生的易感 许多在动物和人类身上的实验证明，细胞内钙
性。在心脏中，Bmal1 调控 Klf15 呈节律性表达，这 调节失衡会增加细胞对VA的敏感性 ［21］ 。心肌细胞
可能是导致VA发作具有时间点高发现象的原因之 膜上存在两种电压门控 Ca 通道：L 型 Ca 通道
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