Page 25 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第5期 金 燚，俞 静，夏 凡，等. 高脂饮食影响小鼠空回肠上皮功能的差异性研究［J］.
2022年5月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（05）：619-624，665 ·621 ·

ment（Life Technologies公司，美国）、GlutaMAX（Gibco 50 NCD
***
***
公司，美国）、1 μmol/L N⁃乙酰半胱氨酸（Sigma⁃Al⁃ HFD *** ***
40 ***
drich公司，美国）、100 U/mL青霉素、100 μg/mL 链霉 *** *** *** ***
（ g ） 30 *** ***
素（Gibco 公司，美国）、50 ng/mL EGF、1 μg/mL R⁃ ***
［7］ 体重
spondin1和100 ng/mL Noggin 。置于5% CO2，37 ℃ 20
细胞孵育箱培养，每天观察，每48 h更换1次培养液。
10
1.3 统计学方法
用 GraphPad Prism 8 统计软件进行分析，数据 0
以均数±标准差（x ± s）表示，采用t 检验进行两组比 8 12 16 20
年龄（周）
较。P < 0.05为差异有统计学意义。 NCD：正常饮食组；HFD：高脂饮食组。与 NCD 组比较， P <
***
0.001（n=20）。
2 结 果
图1 小鼠体重
2.1 HFD导致小鼠体重显著增加 Figure 1 Weight of mice
为了明确 HFD 诱导的肥胖小鼠模型是否构建 肠道上皮在成体哺乳动物各器官中更新最快的基
［8］
成功，对小鼠每周进行称重，结果显示随着 HFD 时 础 。为探究HFD对小鼠空回肠上皮干细胞增殖分
间的增加，小鼠体重明显增加，与正常饮食组有明 化能力的影响，利用3D类器官原代培养技术进行了
显统计学差异（图1）。 体外研究（图4A）。结果显示，与NCD 组比较，培养
2.2 HFD影响小鼠空回肠绒毛、隐窝形态 3 d后HFD组小鼠空肠形成类器官的类隐窝区域数
为了研究HFD是否改变小肠上皮形态，对小鼠 目减少（P < 0.05，图 4B），而回肠形成类器官的类隐
空回肠上皮组织进行HE染色，发现与NCD组相比， 窝区域数目有增高趋势（图 5B）。培养 5 d 后，HFD
HFD组小鼠尽管空回肠的绒毛长度没有明显改变， 组小鼠空肠形成类器官的类隐窝区域数目仍减少
但空回肠的隐窝深度均明显变浅（P < 0.001，图 （图 4C），而回肠形成类器官的类隐窝区域数目明显
2）。与NCD组相比，HFD组小鼠的空肠回肠单位面 增加（P < 0.05，图5C）。以上结果表明HFD对不同区
积内杯状细胞数量无明显变化（图3）。上述结果表 域小肠上皮干细胞增殖分化能力的影响不同。
明HFD影响了小肠上皮形态。 2.4 HFD导致小鼠空回肠上皮凋亡基因表达改变
2.3 HFD影响小鼠空回肠干细胞的增殖分化能力 DNA 损伤或细胞应激诱导 P53 的表达，并导致
［9］
肠道上皮隐窝底部含有活跃的肠道干细胞，是 细胞周期停滞、凋亡 。为明确 HFD 对空回肠上皮
A B C
NCD HFD 400 80
（ μm ） 300 （ μm ） 60 **
（ ×100 ） 空肠绒毛长度 200 空肠隐窝深度 40

空肠 100 20
0 0
NCD HFD NCD HFD

（ μm ） 250 （ μm ） 100
200
80
（ ×100 ） 150 60 ***
回肠 回肠绒毛长度 100 回肠隐窝深度 40
50
20
0 0
NCD HFD NCD HFD
A：空肠、回肠HE染色；B：空肠、回肠绒毛长度定量；C：空肠、回肠隐窝深度定量。NCD：正常饮食组；HFD：高脂饮食组；与NCD组比较，
P < 0.01， P＜0.001（n=4）。
** ***
图2 小肠上皮组织HE染色
Figure 2 HE staining images of small intestinal epithelium