Page 25 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 25
第42卷第5期 金 燚,俞 静,夏 凡,等. 高脂饮食影响小鼠空回肠上皮功能的差异性研究[J].
2022年5月 南京医科大学学报(自然科学版),2022,42(05):619-624,665 ·621 ·
ment(Life Technologies公司,美国)、GlutaMAX(Gibco 50 NCD
***
***
公司,美国)、1 μmol/L N⁃乙酰半胱氨酸(Sigma⁃Al⁃ HFD *** ***
40 ***
drich公司,美国)、100 U/mL青霉素、100 μg/mL 链霉 *** *** *** ***
( g ) 30 *** ***
素(Gibco 公司,美国)、50 ng/mL EGF、1 μg/mL R⁃ ***
[7] 体重
spondin1和100 ng/mL Noggin 。置于5% CO2,37 ℃ 20
细胞孵育箱培养,每天观察,每48 h更换1次培养液。
10
1.3 统计学方法
用 GraphPad Prism 8 统计软件进行分析,数据 0
以均数±标准差(x ± s)表示,采用t 检验进行两组比 8 12 16 20
年龄(周)
较。P < 0.05为差异有统计学意义。 NCD:正常饮食组;HFD:高脂饮食组。与 NCD 组比较, P <
***
0.001(n=20)。
2 结 果
图1 小鼠体重
2.1 HFD导致小鼠体重显著增加 Figure 1 Weight of mice
为了明确 HFD 诱导的肥胖小鼠模型是否构建 肠道上皮在成体哺乳动物各器官中更新最快的基
[8]
成功,对小鼠每周进行称重,结果显示随着 HFD 时 础 。为探究HFD对小鼠空回肠上皮干细胞增殖分
间的增加,小鼠体重明显增加,与正常饮食组有明 化能力的影响,利用3D类器官原代培养技术进行了
显统计学差异(图1)。 体外研究(图4A)。结果显示,与NCD 组比较,培养
2.2 HFD影响小鼠空回肠绒毛、隐窝形态 3 d后HFD组小鼠空肠形成类器官的类隐窝区域数
为了研究HFD是否改变小肠上皮形态,对小鼠 目减少(P < 0.05,图 4B),而回肠形成类器官的类隐
空回肠上皮组织进行HE染色,发现与NCD组相比, 窝区域数目有增高趋势(图 5B)。培养 5 d 后,HFD
HFD组小鼠尽管空回肠的绒毛长度没有明显改变, 组小鼠空肠形成类器官的类隐窝区域数目仍减少
但空回肠的隐窝深度均明显变浅(P < 0.001,图 (图 4C),而回肠形成类器官的类隐窝区域数目明显
2)。与NCD组相比,HFD组小鼠的空肠回肠单位面 增加(P < 0.05,图5C)。以上结果表明HFD对不同区
积内杯状细胞数量无明显变化(图3)。上述结果表 域小肠上皮干细胞增殖分化能力的影响不同。
明HFD影响了小肠上皮形态。 2.4 HFD导致小鼠空回肠上皮凋亡基因表达改变
2.3 HFD影响小鼠空回肠干细胞的增殖分化能力 DNA 损伤或细胞应激诱导 P53 的表达,并导致
[9]
肠道上皮隐窝底部含有活跃的肠道干细胞,是 细胞周期停滞、凋亡 。为明确 HFD 对空回肠上皮
A B C
NCD HFD 400 80
( μm ) 300 ( μm ) 60 **
( ×100 ) 空肠绒毛长度 200 空肠隐窝深度 40
空肠 100 20
0 0
NCD HFD NCD HFD
( μm ) 250 ( μm ) 100
200
80
( ×100 ) 150 60 ***
回肠 回肠绒毛长度 100 回肠隐窝深度 40
50
20
0 0
NCD HFD NCD HFD
A:空肠、回肠HE染色;B:空肠、回肠绒毛长度定量;C:空肠、回肠隐窝深度定量。NCD:正常饮食组;HFD:高脂饮食组;与NCD组比较,
P < 0.01, P<0.001(n=4)。
** ***
图2 小肠上皮组织HE染色
Figure 2 HE staining images of small intestinal epithelium