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第42卷第5期            金   燚,俞 静,夏 凡,等. 高脂饮食影响小鼠空回肠上皮功能的差异性研究[J].
                  2022年5月                   南京医科大学学报(自然科学版),2022,42(05):619-624,665                     ·621 ·


                ment(Life Technologies公司,美国)、GlutaMAX(Gibco             50    NCD
                                                                                                          ***
                                                                                                        ***
                公司,美国)、1 μmol/L N⁃乙酰半胱氨酸(Sigma⁃Al⁃                            HFD                 ***  ***
                                                                        40                     ***
                drich公司,美国)、100 U/mL青霉素、100 μg/mL 链霉                                ***  *** ***  ***
                                                                       ( g )  30  ***  ***
                素(Gibco 公司,美国)、50 ng/mL EGF、1 μg/mL R⁃                      ***
                                         [7]                           体重
                spondin1和100 ng/mL Noggin 。置于5% CO2,37 ℃                20
                细胞孵育箱培养,每天观察,每48 h更换1次培养液。
                                                                        10
                1.3  统计学方法
                    用 GraphPad Prism 8 统计软件进行分析,数据                      0
                以均数±标准差(x ± s)表示,采用t 检验进行两组比                              8          12         16         20
                                                                                        年龄(周)
                较。P < 0.05为差异有统计学意义。                                 NCD:正常饮食组;HFD:高脂饮食组。与 NCD 组比较, P <
                                                                                                             ***
                                                                  0.001(n=20)。
                2  结 果
                                                                                   图1   小鼠体重
                2.1  HFD导致小鼠体重显著增加                                             Figure 1 Weight of mice
                    为了明确 HFD 诱导的肥胖小鼠模型是否构建                        肠道上皮在成体哺乳动物各器官中更新最快的基
                                                                    [8]
                成功,对小鼠每周进行称重,结果显示随着 HFD 时                         础 。为探究HFD对小鼠空回肠上皮干细胞增殖分
                间的增加,小鼠体重明显增加,与正常饮食组有明                            化能力的影响,利用3D类器官原代培养技术进行了
                显统计学差异(图1)。                                       体外研究(图4A)。结果显示,与NCD 组比较,培养
                2.2  HFD影响小鼠空回肠绒毛、隐窝形态                            3 d后HFD组小鼠空肠形成类器官的类隐窝区域数
                    为了研究HFD是否改变小肠上皮形态,对小鼠                         目减少(P < 0.05,图 4B),而回肠形成类器官的类隐
                空回肠上皮组织进行HE染色,发现与NCD组相比,                          窝区域数目有增高趋势(图 5B)。培养 5 d 后,HFD
                HFD组小鼠尽管空回肠的绒毛长度没有明显改变,                           组小鼠空肠形成类器官的类隐窝区域数目仍减少
                但空回肠的隐窝深度均明显变浅(P < 0.001,图                       (图 4C),而回肠形成类器官的类隐窝区域数目明显
                2)。与NCD组相比,HFD组小鼠的空肠回肠单位面                         增加(P < 0.05,图5C)。以上结果表明HFD对不同区
                积内杯状细胞数量无明显变化(图3)。上述结果表                           域小肠上皮干细胞增殖分化能力的影响不同。
                明HFD影响了小肠上皮形态。                                    2.4  HFD导致小鼠空回肠上皮凋亡基因表达改变
                2.3  HFD影响小鼠空回肠干细胞的增殖分化能力                             DNA 损伤或细胞应激诱导 P53 的表达,并导致
                                                                                    [9]
                    肠道上皮隐窝底部含有活跃的肠道干细胞,是                          细胞周期停滞、凋亡 。为明确 HFD 对空回肠上皮
                  A                                                   B                     C
                                NCD                     HFD               400                   80
                                                                         ( μm )  300           ( μm )  60  **
                      ( ×100 )                                           空肠绒毛长度  200           空肠隐窝深度  40


                      空肠                                                  100                   20
                                                                            0                    0
                                                                               NCD   HFD            NCD  HFD

                                                                         ( μm )  250          ( μm )  100
                                                                          200
                                                                                                80
                      ( ×100 )                                            150                   60       ***
                      回肠                                                 回肠绒毛长度  100          回肠隐窝深度  40
                                                                           50
                                                                                                20
                                                                            0                    0
                                                                               NCD   HFD            NCD  HFD
                   A:空肠、回肠HE染色;B:空肠、回肠绒毛长度定量;C:空肠、回肠隐窝深度定量。NCD:正常饮食组;HFD:高脂饮食组;与NCD组比较,
                 P < 0.01, P<0.001(n=4)。
                **     ***
                                                     图2   小肠上皮组织HE染色
                                         Figure 2  HE staining images of small intestinal epithelium
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