Page 30 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第5期
               ·626 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年5月


              高甘油三酯血症成为仅次于胆结石和酒精的急性胰                            结合后可介导脂质摄取、细胞凋亡                  ［18］ 。因此猜测
              腺炎（acute pancreatitis，AP）第三大病因，且高甘油三              CD36 介导游离脂肪酸摄取诱发的内质网应激可能
              酯血症性急性胰腺炎（hypertriglyceridemic pancreati⁃         是HTGP相关肾损伤的重要发病机制。
                                                         ［3］
              tis，HTGP）在急性胰腺炎中的发病率增至 25.6% 。                         本实验通过建立动物模型，运用组织形态学、
              HTGP 患者更容易发生胰腺外器官损伤，最常见的                          免疫荧光等技术检测重要的内质网应激相关因子的
              是急性肺损伤，其次是肾损伤 。急性肾损伤不仅                            表达，进一步探讨高甘油三酯血症性急性胰腺炎中游
                                         ［4］
              会加重胰腺炎的病情，还会发展为急性肾功能衰                             离脂肪酸如何调控内质网应激而加重肾损伤。
                                  ［5］
              竭，增加患者的病死率 。然而，目前HTGP 相关肾
                                                                1  材料和方法
              损伤的具体机制尚不清楚。
                  HTGP 导致肾损伤的机制很复杂，但已有研究                        1.1  材料
              发现肾小管上皮细胞凋亡坏死、炎症、内质网的功                                 SPF 级别雄性 C57BL/6 小鼠 48 只，3~4 周龄、体
              能紊乱等在急性肾损伤发病机制中起重要作用 。                            重20~25 g，由南京医科大学实验动物中心提供。所
                                                         ［6］
              内质网是一种特殊的细胞器，负责分泌蛋白和膜蛋                            有动物实验按照南京医科大学动物伦理和福利委
              白的合成、包装和组装。内质网的有效功能对细胞                            员 会 的 指 导 方 针 进 行 的（批 准 编 号 为 IACUC ⁃
              功能和生存至关重要。一些干扰内质网功能的刺                             1902019）。高脂对照饲料（10%kcal 脂肪热量）、高
              激会破坏内质网内环境稳定，随后内质中未折叠或                            脂饲料（60%kcal脂肪热量）（Research Diets 公司，美
              错误折叠的蛋白质出现异常蓄积，从而导致内质网                            国）。雨蛙素和脂多糖（Sigma⁃Aldrich 公司，美国）。
              应激，内质网应激反过来会激活未折叠蛋白反应和                            磺基⁃N⁃琥珀酰亚胺基油酸酯（sulfo⁃N⁃succinimidyl
              细胞凋亡     ［7- 8］ 。肌醇需要酶 1（inositol⁃requiring en⁃   oleate，SSO）（MedChemExpress 公司，美国）。IRE1
              zyme⁃1，IRE1）/X 盒结合蛋白 1（X⁃box binding pro⁃         抗体、XBP1 抗体和 DAPI（Abcam 公司，英国）；CD36
              tein 1，XBP1）通路是激活未折叠蛋白反应的通路之                      抗体（Proteintech 公司，美国）；全自动生化分析仪
              一。IRE1是最保守的内质网应激传感器，是调节细                          （Olympus 公司，日本）；ELISA 试剂盒（南京建成公
              胞功能障碍的关键分子。XBP1是IRE1α RNA酶活                       司）；光学显微镜（Nikon 公司，日本）；石蜡切片机
              性靶向的 RNAs 之一，活化 IRE1α切割 XBP1 mRNA                 （Leica公司，德国）。
              产生转录活性形式（XBP1s），有助于恢复蛋白质稳                         1.2  方法
              态并促进细胞保护        ［9-10］ 。                          1.2.1 小鼠分组及处理
                  长期摄入高脂饮食可引起外源性脂肪吸收增                                在实验之前所有小鼠均接受适应性饲养 1 周，
              加，导致高脂血症，血清甘油三酯、游离脂肪酸水平                           按照实验中心 SPF 级别饲养条件饲养。48 只小鼠
              升高  ［11］ 。急性胰腺炎时，在多种炎症介质的作用                       随机分为对照组（CON组）、SAP组、HTGP组和CD36
              下，患者机体大多处于全身炎症反应的高代谢状                             抑制剂组（SSO组），每组12只。CON组和SAP组小
              态，热量与蛋白质供给不足，垂体肾上腺轴功能改                            鼠均予高脂对照饲料（10%kcal 脂肪热量）喂养，而
              变，胰岛素分泌减少，胰高血糖素升高导致糖利用                            HTGP 组和 SSO 组予高脂饲料（60%kcal 脂肪热量）
              率下降，此时脂肪代谢轻度亢进，且由胰腺自身消                            喂养。喂养 8 周后开始造模，模型建立前小鼠禁食
              化后产生少量游离脂肪酸进入血液，从而导致游离                            12 h，但可自由饮水。将配制好的雨蛙素和脂多糖
              脂肪酸的升高       ［12］ 。另外，胰腺外分泌腺泡细胞中富                 稀释复温，以待腹腔注射。SAP 组小鼠腹腔注射雨
              含脂肪酶，可水解甘油三酯生成游离脂肪酸和甘                             蛙素（50 μg/kg），每小时1次，共7次，并在最后一次
              油。高浓度的游离脂肪酸具有脂肪毒性，既引起炎                            注射雨蛙素1 h后追加腹腔注射一次脂多糖（10 mg/
                                                         ［13］
              症反应，又对胰腺腺泡和血管内皮细胞造成损伤 。                           kg）。CON 组用等量生理盐水代替雨蛙素和脂多
              同时，游离脂肪酸水平升高还可触发氧化应激和内                            糖。HTGP组、SSO组的雨蛙素和脂多糖的注射剂量
              质网应激    ［14-15］ 。CD36，又称游离脂肪酸转运蛋白，                和方法同 SAP 组，SSO 组在最后一次追加注射脂多
              是一种单链跨膜表面糖蛋白，属于 B 类清道夫受体                          糖后予溶于 1%DMSO 的 CD36 特异性抑制剂 SSO，
              家族  ［16-17］ 。CD36在肾脏内的各种细胞类型中表达，                  以50 mg/kg的剂量单次灌胃给药。造模成功后，在第
              包括近端肾小管上皮细胞、足细胞和系膜细胞                       ［17］ 。  一次注射雨蛙素24 h后，对所有小鼠实施安乐死，获
              CD36作为一个多功能受体，与长链游离脂肪酸配体                          得血样本、胰腺组织、肾组织以进一步分析。
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