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第42卷第5期 郁 蓉，彭云鹏，朱小乐，等. 游离脂肪酸通过IRE1/XBP1通路调控高甘油三酯血症性急性
2022年5月 胰腺炎肾损伤的机制研究［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（05）：625-631 ·627 ·

1.2.2 血清学检测 表1 血清甘油三酯和游离脂肪酸水平
所有血样本室温静置 30 min 后在离心机上以 Table 1 Serum levels of triglyceride and free fatty acids
3 000 r/min离心10 min，收集上清并-80 ℃保存。血 甘油三酯（mmol/L） 游离脂肪酸（μmol/L）
清游离脂肪酸、甘油三酯、淀粉酶采用全自动生化 CON组 1.35 ± 0.25 #* 151.53 ± 25.47 #*
SAP组 1.43 ± 0.27 #* 273.92 ± 34.43 #*
分析仪进行测定。血清肿瘤坏死因子⁃α（TNF⁃α）、
HTGP组 6.85 ± 0.43 #* 778.37 ± 50.69 #*
白细胞介素⁃6（IL⁃6）和白细胞介素⁃1β（IL⁃1β）水平
SSO组 5.92 ± 0.82 #* 810.26 ± 18.14 #*
根据制造商的方案使用酶联免疫吸附试验（ELISA） 与CON组比较，Р < 0.05；与SAP组比较，Р < 0.05。
*
#
试剂盒进行定量。
1.2.3 组织病理学分析 组结构损伤更明显，更多炎性细胞浸润伴坏死、出
将石蜡包埋的胰腺和肾脏标本切成 4 μm 厚的 血增加。根据Schmidt评分标准，SAP组的组织学评
切片，并进行 HE 染色。所有组织切片均由两名对 分也显著高于CON组，而与SAP组比，HTGP组评分
实验不知情的病理学家在400倍放大的光学显微镜 更高。血清淀粉酶是急性胰腺炎诊断的重要生化
下观察，根据之前制定的评分标准对胰腺和肾组织 指标，也是衡量造模是否成功的标志之一。与CON
的病理学变化进行评估 ［19-20］ 。 组比，SAP 组和 HTGP 组的血清淀粉酶水平显著升
1.2.4 免疫荧光检测CD36、IRE1和XBP1的表达 高，而 SAP 组和 HTGP 组的血清淀粉酶没有显著差
肾标本石蜡切片脱蜡、水合、抗原修复后冷却 异（图 1B）。血清炎症因子 IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α水平
至室温。用PBS稀释的3%BSA阻断30 min，然后与 是急性胰腺炎严重程度的衡量指标，也是全身炎症
一抗4 ℃孵育过夜，PBS冲洗3次后与相应荧光素偶 反应的标志物。如图 1C 所示，相比 SAP 组，HTGP
联的二抗孵育。核用 DAPI 复染，封片。在荧光显 组小鼠血清IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α水平明显增高，差异
微镜下观察并采集图像，然后通过 Image Pro Plus 有统计学意义。上述结果表明SAP及HTGP小鼠模
6.0软件进行分析。 型的成功构建，且高甘油三酯血症可加重SAP 导致
1.3 统计学分析 的胰腺损伤甚至全身炎症反应。肾损伤是发生
实验数据用平均值±标准差（x ± s）表示，用 SAP 时常见的胰外并发症之一，其发生率仅次于
［4］
SPSS22.0软件进行统计分析。多组比较采用单因素 肺损伤 。比较 3 组小鼠模型的肾组织病理改变，
方差分析（ANOVA）；两组间比较采用 t 检验。P< 图 1D 显示与 CON 组相比，SAP 组肾小管上皮细胞
0.05为差异有统计学意义。 肿胀、刷状缘缺失、间质水肿、细胞质空泡化、细胞
坏死和肾小管腔内出现坏死细胞碎片，而HTGP组的
2 结 果
肾损伤严重程度和肾组织学评分明显高于SAP 组。
2.1 各组小鼠血清甘油三酯和游离脂肪酸水平 因此，高甘油三酯血症可加重胰腺炎相关肾损伤。
四组小鼠的血清甘油三酯和游离脂肪酸水平 2.3 高甘油三酯血症促进重症急性胰腺炎小鼠肾
测量结果如表 1 所示，予高脂饲料喂养的 HTGP 组 组织中IRE1及XBP1表达
和SSO组小鼠的血清甘油三酯含量相较于高脂对照 游离脂肪酸被广泛认为是HTGP的发病机制之
饲料喂养的 CON 组和 SAP 组小鼠明显增高。这表 一，存在于胰腺腺泡细胞中的脂肪酶可将甘油三酯

明高甘油三酯血症小鼠模型的成功构建。与 CON 水解成游离脂肪酸和甘油 ［13］ 。游离脂肪酸是评价
组相比，SAP 组有较高的游离脂肪酸水平，而HTGP 脂代谢紊乱的重要指标，是启动内质网应激的重要
组血清游离脂肪酸水平含量更高。但使用CD36抑 因素 ［21-22］ 。IRE1、XBP1是内质网应激的相关通路蛋
制剂 SSO 的 HTGP 小鼠，其血清甘油三酯和游离脂 白，采用免疫荧光染色评估 IRE1 和 XBP1 在肾组织
肪酸水平与HTGP组没有显著差异（P > 0.05）。 中的表达水平。如图 2 所示，CON 组的 IRE1 和

2.2 高甘油三酯血症加重SAP小鼠的胰腺、肾损伤 XBP1蛋白未见明显表达，SAP组和HTGP组的IRE1
及全身炎症反应 和 XBP1 表达水平都显著升高，但 SAP 组和 HTGP
CON 组、SAP 组和 HTGP 组小鼠胰腺组织病理 组这两组间相比，HTGP 组肾组织中 IRE1 和 XBP1
学变化如图1A所示，SAP组小鼠胰腺可见组织结构 表达水平进一步升高。由此可知，高甘油三酯血
破坏、炎性细胞浸润、出血和腺泡细胞坏死，而CON 症增加了重症急性胰腺炎小鼠肾组织中的内质网
组胰腺组织病理大体正常。与 SAP 组相比，HTGP 应激。