Page 38 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第5期
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              肌电图，连续进行10次刺激，作为基线。基线测定后                          计学差异（P > 0.05，图1A、D、G），4周rTMS干预后，
              对 M1 区进行高频 rTMS 干预，频率为 10 Hz，串时程                  统计分析发现定位航行阶段（0~4 d）每天的平均逃
              10 s，串间歇5 s，总时间10 min，总脉冲数为1 000 个，               避潜伏期经重复测量的方差分析并未有交互效应
              分别在刺激后0、10、15、30 min这4个时间点采集运                     （F=0.820，P＞0.05），遂对各个时间点采用单因素方
              动诱发电位，分别采集 10 条。高频 rTMS 干预前后                      差分析。干预前后 control 组和 rTMS 组大鼠游泳速
              MEP的波幅的增幅用于测定M1区的LTP样可塑性。                         度的差异均不具有统计学意义（P＞0.05，图 1C）。
              1.2.5 Morris水迷宫                                   在水迷宫的定位航行阶段（0~4 d）时，control 组和
                  采用 Morris 水迷宫进行空间情景记忆的检测，                     rTMS 组平均逃避潜伏期的差异不具有统计学意义
              Mirrois 水迷宫的直径 1.5 m、高 0.5 m、水深 0.22 m，           （P＞0.05，图 1B）。在空间探索阶段（第 5 天）时，与
              共分为 NE、NW、SE、SW 4 个象限，实验时水池温度                     control 组相比，rTMS 组穿过平台的次数增加，且具
              控制在22~24 ℃，实验过程中保持安静。两组大鼠，                        有统计学意义（P＜0.05，图1H），但探索的时间增加
              每组6只进行情景记忆的检测，历时5 d。实验分为                          不明显（P＞0.05，图 1E），证明前额叶高频 rTMS 可
              定位航行和空间探索阶段，在定位航行阶段，将固                            以改善健康大鼠的空间情景记忆。
              定平台放于SE象限正中，隐藏于被黑墨水染色的水                           2.2  健康大鼠M1区LTP样改变
              下2 cm处，将大鼠依次从4个象限面壁放入水中，记                              干预前control组和rTMS组的M1区LTP样改变
              录其找到平台的时间，记为逃避潜伏期。第 5 天为                          无统计学差异（P > 0.05，图 2A）；干预后，与 control
              探索阶段，将平台从水池中取出，并将大鼠从NW象                           组相比 rTMS 组 M1 区 LTP 样改变增强，且具有统计
              限放入，记录其在 60 s 内在平台所在象限探索的时                        学意义（P＜0.05，图2B）。
              间，以及穿过平台的次数。                                      2.3  健康大鼠M1区LTP样改变与认知功能相关性
              1.2.6 Western blot                                分析
                  大鼠在进行rTMS治疗后立即行乙醚麻醉，并断                             4 周 rTMS 干预前、后 M1 区 0 min 的 LTP 样改变
              头处死，取双侧M1区组织，RIPA中度裂解液中剪碎                         与其空间情景记忆正相关，且具有统计学意义（P <
              匀浆提取组织蛋白，经 BCA 试剂盒蛋白定量后，加                         0.05，图3A、B）。
              入DTT（7 μL/100 μL）和上样缓冲液，涡旋仪混匀后                    2.4  M1区NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达
              煮沸，冷却至室温，在-20 ℃冰箱中保存。SDS⁃                              4周高频rTMS干预后，与control组相比rTMS组
              PAGE 凝胶电泳后，转移到 PVDF 膜上，之后封闭                       M1 区 NR1 和 NR2A 蛋白表达上调（P＜0.05、P＜
              2 h。将膜取出，加入一抗，4°孵育过夜；TBST 洗膜                      0.01，图 4A、B），但是两组 NR2B 的表达差异不具有
              10 min×3 次；将膜转入二抗孵育 2 h；用化学发光法                    统计学意义（P＞0.05，图4A、B）。
              显色、曝光、显影定影。所得条带使用 Image J 图像
                                                                3  讨 论
              分析软件分析。
              1.3  统计学方法                                             可塑性是根据外界刺激或一段时间的训练学习
                  在统计分析中数据均以均数±标准误（standard                     重建神经之间的信号连接，它是大脑实现自身重建的
              error，SEM）来表示。M1 区 LTP 样改变和空间情景                   能力。神经系统可塑性的功能性改变，包括突触间分
              记忆均用SPSS 22.0软件进行重复测量的方差分析，                       子水平的改变、突触膜上的改变、神经元水平的改变
              Mauchly 检验是否满足球形假设，有交互作用时分                        以及神经网络间信号传递过程改变四个水平                      ［15-16］ 。
              析各因素的单独效应，无交互作用时，分析各效应                            LTP效应表示突触之间的连接强度增强，其与学习和
              的主效应；运用 Spearman 相关分析 M1 皮层 LTP 样                 记忆密切相关，而LTD则与LTP相反，与神经元死亡
                                                                                             ［16］
              改变和空间情景记忆之间的相关性，独立样本 t 检                          和突触之间的连接强度下降有关 。研究发现药物
              验分析干预后 NR1、NR2A 及 NR2B 的蛋白表达水                     或基因修饰阻断 LTP，会造成记忆和学习能力的严
              平，P＜0.05为差异有统计学意义。                                重缺陷，但通过一段时间的学习训练可以增强大
                                                                      ［16］
                                                                脑 LTP    。研究表明AD患者存在M1皮质LTP样可
              2  结 果
                                                                塑性损害，且认知功能和LTP样可塑性正相关，因此
                                                                                                        ［14］
              2.1  空间情景记忆                                       LTP样可塑性可以用于预测AD患者认知功能 。
                  干预前 control 组和 rTMS 组空间情景记忆无统                      皮质可塑性已经成为近年来非侵入性治疗认
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