Page 44 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 44

第42卷第5期
               ·640 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年5月


                           常氧组            缺氧组                   2C)显示,CDDP 处理后,缺氧条件下siYAP1组细胞
                                                                凋亡率显著高于NC组(P < 0.01)。CCK⁃8检测结果
                   YAP1                            78 kDa
                                                                (图 2D)显示,CDDP 处理后,缺氧条件下 siYAP1 组
                  GAPDH                            36 kDa       细胞活力显著低于NC组(P < 0.01)。
                                                                2.3  过表达 YAP1 降低缺氧条件下骨肉瘤细胞对
                       4
                                      *
                                                                CDDP的敏感性
                       YAP1蛋白相对表达量  2 1                         粒,Western blot 检测结果(图 3A)显示,YAP1 过表
                                                                     在 MG⁃63 细胞中转染 pcDNA⁃3.1⁃YAP1⁃HA 质
                       3
                                                                达组细胞中YAP1蛋白的表达水平较空载体组显著
                                                                升高。CCK⁃8检测结果(图3B)显示,CDDP处理后,


                                                                体组(P < 0.01),而常氧条件下,两组细胞活力无显
                       0                                        缺氧条件下YAP1过表达组细胞活力显著高于空载
                             常氧组           缺氧组
                                                                著差异(P > 0.05)。
                            两组比较,P < 0.05(n=3)。
                                   *
                   图1 缺氧条件下MG⁃63细胞中YAP1的表达                      2.4  YAP1影响缺氧条件下STAT3磷酸化水平
              Figure 1  The expression of YAP1 in MG⁃63 cells under  Western blot 检测结果显示(图 4),在缺氧条件
                       hypoxic condition                        下,与 NC 组相比,siYAP1 组 MG⁃63 细胞中 p⁃STAT3
                                                                蛋白的表达水平显著降低(P < 0.01),而总STAT3蛋
              YAP1 组细胞中 YAP1 蛋白的表达水平较阴性对照                       白的表达水平没有显著变化(P > 0.05)。
              NC 组显著降低(P < 0.01)。流式细胞检测结果(图                     2.5  STAT3影响缺氧条件下骨肉瘤细胞对CDDP的


                      A                            B
                          1.2              常氧               空白对照组     siYAP1组     1.5
                                           缺氧
                                                                 NC组
                         相对细胞活力  0.8    **  ##        YAP1               78 kDa  YAP1蛋白相对表达量  1.0
                          1.0
                                          **
                          0.6
                          0.4
                                                                                  0.5
                          0.2
                           0                        GAPDH                36 kDa    0              △△
                               对照组      CDDP组
                                                                                 空白对照组     NC组 siYAP1组
              C                                                                       D
                           NC组                NC+CDDP组
                  10 4                 10 4
                  10 3                 10 3
                                                                                               对照
                                         2
                   2
              C   10                   10                                             D
                                                              60   对照         △△         1.2   CDDP
                                                              ( % )  50                  1.0
                  10 1                 10 1                        CDDP        **
                  10 0                 10 0                   40      **                 相对细胞活力  0.8  **  △△
                                                                                         0.6
                                                              30
                    10 0  10 1  10 2  10 3  10 4  10 0  10 1  10 2  10 3  10 4  细胞凋亡率  20  0.4             **
                         siYAP1组            siYAP1+CDDP组      10                         0.2
                  10 4                 10 4
                                                               0                           0
                                                                    NC组    siYAP1组             NC组     siYAP1组
                  10 3                 10 3
                  10 2                 10 2
                  10 1                 10 1
                PI  10 0               10 0
                    10 0  10 1  10 2  10 3  10 4  10 0  10 1  10 2  10 3  10 4
                     AV
                 A:CCK⁃8检测细胞活力;B:Western blot 检测YAP1蛋白的表达;C:流式细胞术检测细胞凋亡;D:CCK⁃8检测细胞活力。与对照组比较,
               P < 0.01;与常氧组比较,P < 0.01;与NC组比较, P < 0.01(n=3)。
              **               ##               △△
                                     图2   沉默YAP1增强缺氧条件下MG⁃63细胞对CDDP的敏感性
                            Figure 2  Silencing YAP1 enhances the sensitivity of MG⁃63 cells to CDDP under hypoxia
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