Page 24 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第9期
·1218 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年9月
于磁力搅拌器上备用，取 1 g PLGA 溶于 10 mL 二氯 燥、称重，并用SEM观察PLGA微囊形态变化。
甲烷配置成10%的PLGA溶液置于50 mL注射器，将 1.2.5 PLGA微囊细胞相容性检测
包封的内容物溶液装入 20 mL 注射器。将装有 在 B 通道注射器内置入无菌生理盐水，按 1.2.1
PLGA溶液的注射器与装有包封内容物溶液的注射 制备方法制备空白微囊并冷冻干燥。取50 mg冷冻
器分别安装到微量注射泵的A、B通道，调整A通道 干燥的空白 PLGA 微囊于 1.5 mL 离心管，在 75%乙
注射速度为 580 mL/h，B 通道注射速度为 80 mL/h， 醇中浸泡 1 h，去除乙醇，用 PBS 漂洗 3 遍，加入完
分别连接 A 型同轴针头的外针和内针入口，将同轴 全培养基 100 μL，置于 37 ℃ 150 r/min 恒温摇床
针头置于PVA溶液液面以下，调整磁力搅拌器转速 5 d，离心取上清，用1 mL完全培养基稀释作为实验
为 190 r/min，注射器排气后开始注射，注射结束后 组浸提液培养基。将 MC3T3⁃E1 细胞按 4×10 个/孔
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将针头从 PVA 溶液中取出，制备过程如图 1。磁力 的密度接种于96孔板,于37 ℃、5%CO2和100%湿度
搅拌器控制温度在 39 ℃，搅拌 8~12 h 后，静置烧杯 的孵箱中进行培养，实验组用浸提液完全培养基，对
让PLGA微囊沉淀，随后弃大部分上清，加入无菌去 照组用正常完全培养基，每组设5个孔，每2天换液，
离子水转移至 50 mL 离心管，震荡离心管以清洗微 分别在培养第1、3、5、7天后，吸弃原培养液，每孔加
球，用离心机调整转速 300 r/min 离心 3 min 弃上 入100 μL含10%CCK⁃8的完全培养基，避光孵育2 h，
清。重复清洗、离心过程3次。更换B型同轴针头， 吸取90 μL液体置于另一96孔板，用酶标仪于450 nm
控制微量注射泵及磁力搅拌器的参数不变，重复微 波长下检测吸光度值。
囊制备过程。 取20 μL冷冻干燥的空白PLGA微囊，在75%乙
醇中浸泡 1 h，去除乙醇，用 PBS 漂洗 3 遍，置于 6 孔
B通道 板中作为实验组，不加微囊组为对照组，每组 3 个
B通道
A通道
孔。将 MC3T3⁃E1 细胞按 1×10 个/孔的密度接种于
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A通道
6 孔板，于 37 ℃、5%CO2和 100%湿度的孵箱中进行
PVA溶液 培养，每 3 d 换液，7 d 后用 Calcein/PI 细胞活性与细
胞毒性检测试剂盒按照说明书对细胞进行染色，倒
图1 PLGA微囊制备示意图 置荧光显微镜观察染色结果。
Figure 1 Schematic diagram of preparation of PLGA
microspheres 1.2.6 细胞趋化实验
按照 1.2.1 中 PLGA 微囊的制备方法，将 B 通道
1.2.2 PLGA微囊的形态及粒度分析 注射器替换为500 ng/mL的大鼠BMP⁃2，更换两种型
在B通道注射器内置入0.1%亚甲蓝染色液，按 号的同轴针头，获得并收集载有BMP⁃2的两种囊壁
1.2.1中制备方法制备微囊并冷冻干燥，用光学显微 厚度的 PLGA 微囊。各取 20 μL 体积的两种 PLGA
镜及扫描电子显微镜在 10 kV 电压下观察 PLGA 微 微囊，在75%乙醇中浸泡1 h，去除乙醇，用PBS漂洗
囊的形态。收集同一批次制备的所有微囊并用粒 3 遍后置于 24 孔板中 Transwell 小室的下室，并加入
度分析仪测试微囊粒径，检测3批样本，取均值。 培养基 700 μL，上室加 200 μL 培养基重悬后的
1.2.3 PLGA微囊囊壁厚度分析 MC3T3⁃E1 细胞，接种密度为 5×10 个/室。不加微
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按照 1.2.1 中 PLGA 微囊的制备方法，在 B 通道 囊组为空白对照，每组 3 个孔，24 h 后观察细胞迁
注射器内加入 100 μg/mL 的荧光素钠溶液，更换使 移结果。
用两种型号同轴针头，分别收集两种微囊并于正置 1.3 统计学方法
荧光显微镜下观察，用图像处理软件Image J测量微 所有定量数据均采用统计分析软件 SPSS 22.0
囊囊壁厚度（n=286）并统计分析。 进行独立样本t 检验，结果以均数±标准差（x ± s）表
1.2.4 PLGA微囊的降解 示，P < 0.05为差异有统计学意义。
冻干后两种囊壁厚度的 PLGA 微囊分别称取
2 结 果
50 mg 置于 1.5 mL 离心管中，每种厚度设 5 个离心
管，每个离心管中加入 1 mL PBS（PH=7.4），将离心 2.1 PLGA微囊的形态及粒度分析
管置于 150 r/min 恒温摇床，每隔 1、3、7、14、21、28、 同轴双通道注射法制备的PLGA微囊形态及粒
35、42、49、70 d 取出离心管并离心，去上清，冷冻干 度表征见图2，结果显示：该方法制备的两种厚度囊
