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第42卷第9期 胡钰洁,吴         迪,黄燕华,等. 外周血Circ_0070934/miR⁃199a⁃5p/MGAT3作为生物标志物在过敏性鼻炎⁃
                  2022年9月         哮喘综合征中的诊断价值[J]. 南京医科大学学报(自然科学版),2022,42(09):1279-1286 ·1281                ·


                生物工程股份有限公司)进行反转录。使用 Super⁃                        态分布的资料),受试者操作特征(receiver operating
                Real PreMix Plus(SYBR Green)(北京天根生化科技             characteristic,ROC)曲线判断诊断灵敏度与特异度,
                有限公司)对mRNA和circRNA进行扩增,使用miR⁃                     通过曲线下面积(area under the curve,AUC)判断诊断
                NA 荧光定量 PCR 试剂盒(染料法)(上海生工生物                       效果,AUC=0.5,无诊断价值,AUC 越接近 1,提示诊断
                工程股份有限公司)对 miRNA 进行扩增,用 ABI                       越准确,P < 0.05 为差异有统计学意义(双尾法)。
                                            -ΔΔCT 法进行数据的相
                7300型荧光定量PCR仪,采用2
                                                                  2  结 果
                对 定 量 分 析 。 circ0070934 的 内 参 为 GAPDH,
                MGAT3 的内参为 GAPDH+ACTB,miRNA 的内参为                  2.1  研究对象的临床特征
                U6。MGAT3、circ_0070934 、ACTB、GAPDH 的上下                 本研究纳入 38 例 CARAS 患者及 43 例健康对
                游引物和miR⁃199a⁃5p的上游引物由北京博迈德公                       照,两组年龄、性别、体重指数(body mass index,
                司合成,U6 的上下游引物和 miR⁃199a⁃5p 的下游引                   BMI)匹配。与健康对照组相比,CARAS 组患者肺
                物为 miRNA 荧光定量 PCR 试剂盒提供的通用引                       功能第 1 秒用力呼气容积占预计值百分比(percent

                物。引物序列如下:MGAT3(F:5′⁃TCCTGTTTCCCT⁃                 predicted forced expiratory volume in one ⁃ second,
                CACTGTGC ⁃ 3′ ;R:3′ ⁃ ACACACGCACAA ⁃ ACAT⁃        FEV1% pred)及第 1 秒用力呼气容积占用力肺活量
                GAGC⁃5′);circ_0070934(F:5′⁃GGTGAAAG⁃GACT⁃         比 值(the first second forced expiratory volume ratio
                GATCAACCAT ⁃ 3′ ;R:5′ ⁃ TGTCTTGAGCTT ⁃ TCCT⁃      of forced vital capacity,FEV1/FVC)显 著 降 低(P <
                GCCT ⁃ 3′);miR ⁃ 199a ⁃ 5p(F:5′ ⁃ CCCAGTGTT ⁃     0.05),而嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)绝对值、
                CAGACTACCTGTTC⁃3′);ACTB(F:5′⁃TCCGCAAA⁃            EOS 比例及呼出气一氧化氮(FeNO)明显高于对照
                GACCTGTACGC⁃3′;R:5′⁃CTGGAAGGTGGACAGC⁃             组(P < 0.001,表1)。
                GAG⁃3′);GAPDH(F:5′⁃TCGACAGTCAGCCGCAT⁃             2.2  CARAS 组与健康对照组血浆 MGAT3 的表达
                CTTCTTT⁃3′,R:5′⁃ACCAAATCCGTTGACTCCGAC⁃            水平
                CTT⁃3′)。                                              ELISA 实验结果显示,CARAS 组患者外周血血
                1.3  统计学方法                                        浆 MGAT3 的表达量(0.20±0.05)较对照组(0.32±
                    采用 SPSS 21.0 统计软件,计量资料采用 Kol⁃                 0.31)明显下降(P=0.035,图1)。
                mogorov⁃Smirnov 检验进行正态性检验,对符合正态                   2.3  CARAS 组与健康对照组 circ_0070934、miR⁃
                分布的计量资料以均数±标准差(x ± s)表示,不符合                       199a⁃5p及MGAT3的表达水平
                正态分布的计量资料以中位数(四分位数)[M(P25,                            qRT ⁃ PCR 结 果 显 示 ,与 健 康 对 照 组 相 比 ,
                P75 )]表示,分类变量资料以比例表示,两样本比较                        MGAT3 在 CARAS 组中表达明显降低(图 2A,P <
                采用t检验(正态分布的资料)或 Mann⁃Whitney U检                   0.001),circ_0070934 在 CARAS 组中表达也明显降
                验(非正态分布资料),相关关系采用 Pearson 相关分                     低(图 2B,P=0.001),而 miR⁃199a⁃5p 的表达量则明
                析(正态分布的资料)或 Spearman 秩相关分析(非正                     显上调(图2C,P=0.013)。

                                                      表1   研究对象临床特征
                                               Table 1 Clinical characteristics of subjects
                           临床特征                     CARAS组(n=38)             健康对照组(n=43)               P值
                    性别[n(%)]                                                                           0.653
                      男                            00.22(57.9)              00.27(62.8)
                      女                            00.16(42.1)              00.16(37.2)
                    年龄(岁,x ± s)                       40.73 ± 13.65            40.30 ± 10.40           0.738
                    BMI(kg/m ,x ± s)                  25.30 ± 3.460            26.43 ± 3.510           0.606
                            2
                    FEV1% pred(x ± s)                 88.19 ± 27.27            108.00 ± 8.67           0.024
                    FEV1/FVC[%,M(P25,P75 )]        73.55(67.13,82.00)       83.00(97.70,114.10)        0.016
                    EOS[×10 个/L,M(P25,P75 )]       00.36(0.20,0.71)         00.12(0.07,0.21)          <0.001
                           9
                    EOS比例(%,x ± s)                     6.00 ± 4.38              1.80 ± 1.33           <0.001
                    FeNO[ppb,M(P25,P75 )]          61.00(26.50,93.50)       19.00(14.00,27.00)        <0.001
   82   83   84   85   86   87   88   89   90   91   92