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第42卷第9期 胡钰洁,吴 迪,黄燕华,等. 外周血Circ_0070934/miR⁃199a⁃5p/MGAT3作为生物标志物在过敏性鼻炎⁃
2022年9月 哮喘综合征中的诊断价值[J]. 南京医科大学学报(自然科学版),2022,42(09):1279-1286 ·1281 ·
生物工程股份有限公司)进行反转录。使用 Super⁃ 态分布的资料),受试者操作特征(receiver operating
Real PreMix Plus(SYBR Green)(北京天根生化科技 characteristic,ROC)曲线判断诊断灵敏度与特异度,
有限公司)对mRNA和circRNA进行扩增,使用miR⁃ 通过曲线下面积(area under the curve,AUC)判断诊断
NA 荧光定量 PCR 试剂盒(染料法)(上海生工生物 效果,AUC=0.5,无诊断价值,AUC 越接近 1,提示诊断
工程股份有限公司)对 miRNA 进行扩增,用 ABI 越准确,P < 0.05 为差异有统计学意义(双尾法)。
-ΔΔCT 法进行数据的相
7300型荧光定量PCR仪,采用2
2 结 果
对 定 量 分 析 。 circ0070934 的 内 参 为 GAPDH,
MGAT3 的内参为 GAPDH+ACTB,miRNA 的内参为 2.1 研究对象的临床特征
U6。MGAT3、circ_0070934 、ACTB、GAPDH 的上下 本研究纳入 38 例 CARAS 患者及 43 例健康对
游引物和miR⁃199a⁃5p的上游引物由北京博迈德公 照,两组年龄、性别、体重指数(body mass index,
司合成,U6 的上下游引物和 miR⁃199a⁃5p 的下游引 BMI)匹配。与健康对照组相比,CARAS 组患者肺
物为 miRNA 荧光定量 PCR 试剂盒提供的通用引 功能第 1 秒用力呼气容积占预计值百分比(percent
物。引物序列如下:MGAT3(F:5′⁃TCCTGTTTCCCT⁃ predicted forced expiratory volume in one ⁃ second,
CACTGTGC ⁃ 3′ ;R:3′ ⁃ ACACACGCACAA ⁃ ACAT⁃ FEV1% pred)及第 1 秒用力呼气容积占用力肺活量
GAGC⁃5′);circ_0070934(F:5′⁃GGTGAAAG⁃GACT⁃ 比 值(the first second forced expiratory volume ratio
GATCAACCAT ⁃ 3′ ;R:5′ ⁃ TGTCTTGAGCTT ⁃ TCCT⁃ of forced vital capacity,FEV1/FVC)显 著 降 低(P <
GCCT ⁃ 3′);miR ⁃ 199a ⁃ 5p(F:5′ ⁃ CCCAGTGTT ⁃ 0.05),而嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)绝对值、
CAGACTACCTGTTC⁃3′);ACTB(F:5′⁃TCCGCAAA⁃ EOS 比例及呼出气一氧化氮(FeNO)明显高于对照
GACCTGTACGC⁃3′;R:5′⁃CTGGAAGGTGGACAGC⁃ 组(P < 0.001,表1)。
GAG⁃3′);GAPDH(F:5′⁃TCGACAGTCAGCCGCAT⁃ 2.2 CARAS 组与健康对照组血浆 MGAT3 的表达
CTTCTTT⁃3′,R:5′⁃ACCAAATCCGTTGACTCCGAC⁃ 水平
CTT⁃3′)。 ELISA 实验结果显示,CARAS 组患者外周血血
1.3 统计学方法 浆 MGAT3 的表达量(0.20±0.05)较对照组(0.32±
采用 SPSS 21.0 统计软件,计量资料采用 Kol⁃ 0.31)明显下降(P=0.035,图1)。
mogorov⁃Smirnov 检验进行正态性检验,对符合正态 2.3 CARAS 组与健康对照组 circ_0070934、miR⁃
分布的计量资料以均数±标准差(x ± s)表示,不符合 199a⁃5p及MGAT3的表达水平
正态分布的计量资料以中位数(四分位数)[M(P25, qRT ⁃ PCR 结 果 显 示 ,与 健 康 对 照 组 相 比 ,
P75 )]表示,分类变量资料以比例表示,两样本比较 MGAT3 在 CARAS 组中表达明显降低(图 2A,P <
采用t检验(正态分布的资料)或 Mann⁃Whitney U检 0.001),circ_0070934 在 CARAS 组中表达也明显降
验(非正态分布资料),相关关系采用 Pearson 相关分 低(图 2B,P=0.001),而 miR⁃199a⁃5p 的表达量则明
析(正态分布的资料)或 Spearman 秩相关分析(非正 显上调(图2C,P=0.013)。
表1 研究对象临床特征
Table 1 Clinical characteristics of subjects
临床特征 CARAS组(n=38) 健康对照组(n=43) P值
性别[n(%)] 0.653
男 00.22(57.9) 00.27(62.8)
女 00.16(42.1) 00.16(37.2)
年龄(岁,x ± s) 40.73 ± 13.65 40.30 ± 10.40 0.738
BMI(kg/m ,x ± s) 25.30 ± 3.460 26.43 ± 3.510 0.606
2
FEV1% pred(x ± s) 88.19 ± 27.27 108.00 ± 8.67 0.024
FEV1/FVC[%,M(P25,P75 )] 73.55(67.13,82.00) 83.00(97.70,114.10) 0.016
EOS[×10 个/L,M(P25,P75 )] 00.36(0.20,0.71) 00.12(0.07,0.21) <0.001
9
EOS比例(%,x ± s) 6.00 ± 4.38 1.80 ± 1.33 <0.001
FeNO[ppb,M(P25,P75 )] 61.00(26.50,93.50) 19.00(14.00,27.00) <0.001