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第42卷第9期
               ·1280 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年9月


              0.539，the sensitivity was 92.1%，the specificity was 93.0%，and the AUC was 0.959（95%CI：0.916~1.000，P < 0.001）. Conclusion：
              Altered expressions of circ_0070934/miR⁃199a⁃5p/MGAT3 were confirmed in the peripheral blood of CARAS patients，which can be
              used as a biomarker for the diagnosis of CARAS. Further researches on the specific role and mechanism of circ_0070934/miR⁃199a⁃5p/
              MGAT3 in CARAS will help to discover new diagnostic and therapeutic targets of CARAS.
             ［Key words］ combined allergic rhinitis and asthma syndrome（CARAS）；circ_0070934；miR⁃199a⁃5p；MGAT3；biomarker
                                                                           ［J Nanjing Med Univ，2022，42（09）：1279⁃1286］





                  支气管哮喘（哮喘）是一种反复发作的慢性气                          科大学附属常州二院呼吸与危重症医学科门诊收
              道疾病，以慢性气道炎症、气道高反应、可逆性气流                           集 38 例 CARAS 患者和 43 例性别、年龄匹配的健康
              受限和气道重塑为特征，表现为反复发作的喘息、                            对照。过敏性鼻炎诊断标准参照中国过敏性鼻炎
                                                                         ［6］
                                         ［1］
              气促、胸闷、咳嗽等呼吸道症状 。过敏性鼻炎和哮                           诊治指南 ，哮喘诊断根据我国2020版支气管哮喘
              喘分别表现为上呼吸道和下呼吸道炎症，两者在病                            防治指南 ，CARAS 的诊断须同时符合过敏性鼻炎
                                                                         ［7］
              因、免疫学和发生机制等方面均极为相似，因此，根                           和哮喘的诊断标准。正常对照组为健康志愿者，无
              据“同一气道、同一疾病”概念，近年来提出过敏性                           哮喘和过敏性鼻炎病史，无其他过敏性及免疫系统

              鼻炎⁃哮喘综合征（combined allergic rhinitis and asth⁃     疾病等。CARAS患者为初诊患者，未使用抗哮喘药
              ma syndrome，CARAS）这一新医学诊断名称，指同时                   物。所有受试者均需排除合并感染、肺栓塞、慢性
              发生的临床或亚临床上呼吸道过敏（过敏性鼻炎）                            阻塞性肺疾病、肺结核、血液系统疾病及肝脏功能
              和下呼吸道过敏性症状（哮喘） 。                                  异常等疾病，均进行血常规、肝功能、肾功能、血糖、
                                         ［2］
                  非编码 RNA（non⁃coding RNA，ncRNA）是指转              血脂以及心电图等检查以排除基础疾病。所有受
              录组中不翻译为蛋白质的RNA分子，包括长链非编                           试者均需签署知情同意书，本研究获得南京医科大
              码 RNA（long non⁃coding RNA，lncRNA）、微小 RNA          学附属常州二院伦理委员会批准（批件号：［2020］
             （microRNA，miRNA）、环形 RNA（circular RNA，circ⁃         KY213⁃01）。
              RNA）等 。ncRNA在过敏性疾病（包括过敏性鼻炎                        1.2  方法
                     ［3］
              和哮喘）的发生发展中发挥重要作用，参与了气道                            1.2.1 采集血液样本
              炎症应答、气道重塑、气道高反应、上皮分化、黏液                                用EDTA抗凝管收集患者和健康对照的静脉外
              生成等重要过程，并有望成为疾病诊断的生物标志                            周血 10 mL，其中 5 mL 低速离心机 3 000 r/min 离心
              物和治疗靶标 。研究报道，miR⁃199a⁃5p在中性粒                      10 min，分离血清，用于 ELISA 测量 MGAT3 蛋白水
                          ［4］
              细胞哮喘患者外周血及诱导痰液中的表达升高，并                            平 ；另 留 存 5 mL 全 血 用 于 qRT ⁃ PCR 测 定 circ_
                                 ［5］
              且和肺功能呈负相关 ，但在CARAS患者中的表达                          0070934、miR⁃199a⁃5p及MGAT3的表达水平。所有
              水平变化及相关研究未见文献报道。本研究通过                             受试者的血液样本均储存于-80 ℃。
              circBANK 基因库预测到环形 RNA circ_0070934 与              1.2.2 ELISA测定
              miR⁃199a⁃5p 结合，并且通过 Targetscan 预测 miR⁃                 人MGAT3 ELISA试剂盒（上海科兴生物科技有
              199a⁃5p 靶向调控甘露糖甙乙酰氨基葡糖转移酶                         限 公 司）对 CARAS 患 者 和 对 照 组 血 清 样 本 中
             （mannoside acetylglucosaminyltransferase 3，MGAT3）。  MGAT3的含量进行检测，严格按照试剂盒说明书进
              本研究旨在通过比较CARAS患者和健康对照外周血                          行实验和操作。
              中 circ_0070934/miR⁃199a⁃5p/MGAT3 的表达差异，           1.2.3 qRT⁃PCR检测
              探讨其作为CARAS早期诊断生物标志物的价值，评估                              使用 RNAliquid 超速全血总 RNA 提取试剂盒
              其与CARAS患者相关临床指标之间的相关性，为进一                         （北京汇天东方科技有限公司）提取总RNA，实验步
              步研究其在CARAS发生发展中的机制打下基础。                           骤按照说明书进行。使用紫外线分光光度计对提

                                                                取的 RNA 浓度及纯度进行检测。采用 FastQuant
              1  对象和方法
                                                                cDNA 第一链合成试剂盒（北京天根生化科技有限公
              1.1  对象                                           司）进行反转录，合成 mRNA cDNA/circRNA cDNA。
                  本研究于 2020 年 7 月—2021 年 12 月在南京医               采用 miRNA 第一链 cDNA 合成（加尾法）（上海生工
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