Page 17 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第10期 徐辉军，王玉婷，秦亚娟，等. 靶向MPO的次氯酸荧光探针用于细胞成像［J］.
2023年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（10）：1342-1349 ·1343 ·

过程中产生各自的次卤酸（HClO、HBrO、HIO 或 O NH2
O S
HOSCN），且由于血浆中 Cl 的浓度远远高于其他卤 HN
-
N
N N H
化物，所以 HClO 是 MPO 卤化循环中最丰富和最重 H NH O
O HS
要的产物 ［6］ 。脑卒中发生后，MPO 被激活，引发
N Si N NH
HClO大量产生。
NH2
O
近年来，HClO 荧光探针的研究取得了显著进
OH
展，虽然已发表的探针在体外对 HClO 均有很好的
图1 探针SiRho⁃GABA⁃KYC结构
灵敏度、选择性、稳定性，且在细胞实验中获得了
Figure 1 The structure of SiRho⁃GABA⁃KYC
优秀的检测效果，然而其较短的激发和发射波长
（一般情况下λ ex < 600 nm，λ em < 650 nm）会带来多 司，美国）；硅胶板（薄层层析用，青岛化工研究所）；
种问题，如可能会受到体内自身荧光信号的干扰、 多功能酶标仪（SYNERGY H1，BioTek 公司，美国）；
对生物样品产生光毒性以及可能出现光漂白现象 气浴恒温振荡器（CHA⁃S THZ⁃82 ZD⁃85，江苏正基
等 ［7-8］ 。且它们没有靶向检测 MPO 的能力，在体内 仪器有限公司）；台式低速冷冻离心机（CenLee 5R，
使用受到限制。 湖南湘立科学仪器有限公司）；CO2培养箱（HERA⁃
本文以具有高光稳定性和近红外发射能力的 cell 150i，Thermo Scientific 公司，美国）；紫外分光光
硅罗丹明为荧光基团，通过酰肼硫脲键连接MPO的 度计（UV⁃2450，Shimadzu 公司，日本）；荧光分光光
［9- 10］
靶向基团 KYC 合成 SiRho⁃GABA⁃KYC（图 1） 。 度计（FL⁃4600，Hitachi 公司，日本）；激光共聚焦显
HClO存在时硅罗丹明⁃硫氨基脲会发生环化反应并 微镜（LSM 800，Zeiss公司，德国）。化学试剂除特殊
产生显著的荧光启动反应 ［11］ 。该探针可在体外特 说明外均为市售试剂。
异性检测HClO，可用于细胞成像。 1.1.2 细胞系与培养条件

1 材料和方法 HeLa细胞常规培养于含10%胎牛血清，80 U/mL
青霉素，0.08 mg/mL 链霉素的 DMEM 培养基，置于
1.1 材料 5% CO2，37 ℃的培养箱中。
1.1.1 试剂和仪器 1.2 方法
1 13
H NMR、C NMR（400 MHz 核磁共振仪，JEOL 1.2.1 化合物的合成
公司，日本）；质谱（Agilent⁃6410 LC/MS，Agilent 公 化合物的合成方法如图2所示。

O O
① ② ③
O N⁃NH2
N Br N Si N
N Si N N Si N

xhj⁃2⁃1 xhj⁃2⁃2 xhj⁃2⁃3
O
O
④
H2N OH S N OH ⑤
isoGABA
O NH2
O O
S O S
N HN
N N H ⑥ N OH
H NH O N N H
O HS H
HN
N Si N
N Si N
NH2
O
SiRho⁃GABA⁃KYC OH SiRho⁃GABA⁃OH
试剂和条件：①正丁基锂，3⁃溴⁃N，N⁃二甲基苯胺，四氢呋喃，-78 ℃~25 ℃；②2⁃羧基苯甲醛，溴化铜，140 ℃；③水合肼，乙醇，80 ℃；④二硫
化碳，碘，三乙胺，四氢呋喃/水，0 ℃；⑤N，N⁃二甲基甲酰胺，氩气，90 ℃；⑥固相肽合成。
图2 化合物的合成方法
Figure 2 Synthetic scheme for the compounds