Page 20 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第10期
·1346 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年10月

中浓度为 0、5、10、15、20、30 μmol/L）和 opti⁃MEM 预 示。两组间比较采用t检验，P < 0.05为差异有统计
孵育30 min后，更换opti⁃MEM，然后加入SiRho⁃GA⁃ 学意义。
BA ⁃ KYC（细 胞 培 养 基 中 浓 度 为 10 μmol/L，1%
2 结 果
DMF）和Hoechst 33258（8 μmol/L）孵育30 min后，弃
去上清液，用 PBS 缓冲液清洗细胞 3 次，加 4%多聚 2.1 探针的光谱特性
甲醛于室温下固定15 min后，用PBS清洗3次，取出 SiRho⁃GABA⁃KYC 加入HClO后，如图3A所示，
盖玻片，细胞贴壁面朝下置于载玻片（滴加 5 μL 抗 紫外最大吸收波长位于 660 nm。随后检测 SiRho⁃
荧光猝灭剂）上，盖玻片四周用指甲油密封，避光， GABA⁃KYC 与 HClO 反应后的荧光发射，如图 3B 所
使用Zeiss LSM 800激光共聚焦显微镜观察拍照。 示，探针 SiRho⁃GABA⁃KYC 和 HClO 反应后，其最大
1.3 统计学方法 激发波长位于 660 nm，最大发射波长位于 681 nm，
实验数据结果采用GraphPad Prism7软件分析， 但是使用 660 nm 激发会影响发射光谱，所以使用
符合正态分布的定量数据以均数±标准差（x ± s）表 620 nm作为激发波长。

A B 8 000 SiRho⁃GABA⁃KYC+HCIO
SiRho⁃GABA⁃KYC
0.03
SiRho⁃GABA⁃KYC+HCIO 7 000 激发光谱
0.02 （ a.u. ） 6 000 发射光谱
5 000
吸光值 0.01 荧光强度 4 000
3 000
0 2 000
1 000
-0.01 0
300 400 500 600 700 800 550 600 650 700 750 800
波长（nm） 波长（nm）
A：在HClO（50 μmol/L）存在下，SiRho⁃GABA⁃KYC（5 μmol/L）在PBS中的紫外⁃可见吸收光谱；B：在HClO（50 μmol/L）存在下，SiRho⁃GABA⁃
KYC（5 μmol/L）在PBS中的激发光谱和发射光谱，PBS（50% DMF，pH 5.0）。
图3 SiRho⁃GABA⁃KYC的光谱特性
Figure 3 Spectral characteristics of SiRho⁃GABA⁃KYC

2.2 探针对HClO的浓度依赖性 处的荧光强度与HClO浓度（0~50 μmol/L）进行线性
检测 SiRho⁃GABA⁃KYC 与不同浓度 HClO 反应 拟合，如图 4B 所示，HClO 在 0~25 μmol/L 的浓度范
的荧光发射，如图 4A 所示，发现随着 HClO 浓度 围内存在良好的线性关系（y=276.5x+70.51，R =
2
（0~25 μmol/L）的升高，荧光也逐渐增强。将681 nm 0.996）。

A HClO（μmol/L） B C
8 000 8 000
50.00 8 000
7 000 40.00 7 000 7 000
25.00 6 000
6 000
（ a.u. ） 5 000 HClO 20.00 （ a.u. ） 5 000 （ a.u. ） 6 000
50 μmol/L
5.00
5 000
荧光强度 4 000 0 1.00 荧光强度 4 000 荧光强度 4 000
2.50
0.75
3 000
3 000
3 000
2 000 0.50 2 000
0.25 2 000
1 000 0 1 000 1 000
0 0 0
640 660 680 700 720 740 760 780 800 0 10 20 30 40 50 0 5 10 15 20 25
波长（nm） HClO浓度（μmol/L） HClO浓度（μmol/L）
A：在不同浓度HClO（0~50 μmol/L）存在下，SiRho⁃GABA⁃KYC（5 μmol/L）在PBS中的荧光光谱；B：在HClO 0~50 μmol/L范围内对SiRho⁃GA⁃
BA⁃KYC 的荧光强度进行线性拟合；C：在HClO 0~25 μmol/L 范围内对SiRho⁃GABA⁃KYC 的荧光强度进行线性拟合；PBS（50% DMF，pH 5.0），
λex=620 nm，λem=681 nm，n=3。
图4 SiRho⁃GABA⁃KYC的浓度依赖性
Figure 4 Concentration dependence of SiRho⁃GABA⁃KYC