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第43卷第10期 徐辉军，王玉婷，秦亚娟，等. 靶向MPO的次氯酸荧光探针用于细胞成像［J］.
2023年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（10）：1342-1349 ·1345 ·
30 min后抽干DMF。DMF洗涤6次，振摇5 min/次。 2.83~2.67（m，5H），2.25~2.18（m，1H），1.87（t，J=
肽键的形成：加入含 20 %哌啶的 DMF（9 mL）， 7.2 Hz，2H），1.63~1.35（m，4H），1.21（d，J=6.9 Hz，
振摇5 min，抽干；再次加入相同的DMF溶液（9 mL）， 4H），0.49（d，J=14.1 Hz，6H）。MS（ESI）m/z：491.34
+
振摇 40 min，抽干；DMF 洗涤 6 次。加入 Fmoc⁃Cys ［1/2M+H］。
（Trt）⁃OH（2.5 eq，1 038 mg），六氟磷酸苯并三唑⁃1⁃ 1.2.2 活性测试
基⁃氧基三吡咯烷基磷（PyBop）（2.5 eq，927 mg）， 1.2.2.1 光谱测量
1⁃羟基苯并三唑（HOBT）（2.5 eq，240 mg），N，N⁃二 紫外测定：在PBS（50% DMF，pH 5.0）中，SiRho⁃
异丙基乙胺（DIPEA）（4.0 eq，472 μL），DMF（9 mL）， GABA⁃KYC（5 μmol/L）与 HClO（50 μmol/L，PBS）于
26 ℃恒温振摇 4 h。抽干，DMF 洗涤 6 次，每次振摇 37 ℃孵育30 min后检测紫外吸收光谱。
5 min，抽干。 荧光测定：在PBS（50% DMF，pH 5.0）中，SiRho⁃
二肽：加入含 20%哌啶的 DMF（9 mL），振摇 GABA⁃KYC（5 μmol/L）与 HClO（50 μmol/L，PBS）于
5 min，抽干；再次加入相同的 DMF 溶液（9 mL），振 37 ℃孵育30 min后，检测激发光谱和发射光谱。
摇 40 min，抽干；DMF 洗涤 6 次。加入 Fmoc⁃Tyr pH 稳定性：在不同 pH（4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、
（tBu）⁃OH（2.5 eq，815 mg），PyBop（2.5 eq，927 mg）， 6.5、7.0、7.4、8.0、8.5）的 PBS 缓冲液（50% DMF）中，
HOBT（2.5 eq，240 mg），DIPEA（4.0 eq，472 μL）， SiRho⁃GABA⁃KYC（5 μmol/L）与HClO（50 μmol/L）于
DMF（9 mL），恒温 26 ℃振摇 4 h。抽干，DMF 洗涤 37 ℃孵育30 min后，用620 nm激发检测波长681 nm
6 次，振摇5 min/次，抽干。 处的荧光强度。
三肽：加入含 20%哌啶的 DMF（9 mL），振摇 浓度依赖性：在 PBS（50% DMF，pH 5.0）中，
5 min，抽干；再次加入相同的 DMF 溶液（9 mL），振 SiRho⁃GABA⁃KYC（5 μmol/L）与HClO（0、0.25、0.50、
摇 40 min，抽干；DMF 洗涤 6 次。加入 Fmoc⁃Lys 0.75、1.00、2.50、5.00、10.00、20.00、25.00、40.00、
（Boc）⁃OH（2.5 eq，834 mg），PyBop（2.5 eq，927 mg）， 50.00 μmol/L）于37 ℃孵育30 min后检测荧光光谱。
HOBT（2.5 eq，240 mg），DIPEA（4.0 eq，472 μL）， 选择性：在 PBS（50% DMF，pH 5.0）中，SiRho⁃
DMF（9 mL），恒温 26 ℃振摇 4 h。抽干，DMF 洗涤 GABA⁃KYC（5 μmol/L）与不同底物（50 μmol/L）于
6 次，振摇5 min/次，抽干。 37 ℃孵育30 min后，用620 nm激发检测波长681 nm
四肽：加入含 20%哌啶的 DMF（9 mL），振摇 处 的 荧 光 强 度 。 各 组 底 物 ：①Control；②H2O2；
5 min，抽干；再次加入相同的 DMF 溶液（9 mL），振 ③HBrO；④ · OH；⑤tBuOO·；⑥ROO·；⑦TBHP；
+
-
-
-
+
摇40 min，抽干；DMF 洗涤6次。加入SiRho⁃GABA⁃ ⑧ONOO ；⑨NO； 10 NO 2 ； 11 NO 3 ； 12 Na ； 13 K ；
-
3+
2+
2+
2+
2+
-
OH（1.05 eq，440 mg），PyBop（1.2 eq，460 mg），HOBT 14 Ca ； 15 Mg ； 16 Zn ； 17 Cu ； 18 Fe ； 19 Cl ；20 I ；
（1.2 eq，120 mg），DIPEA（2.0 eq，236 μL），DMF 21 Arg； 22Gly； 23Glu； 24Cys； 25H2S； 26GSH； 27HOCl。
（9 mL），恒温 26 ℃振摇 4 h。抽干，DMF 洗涤 6 次， 1.2.2.2 细胞毒性
振摇5 min/次，抽干。 取处于对数生长期的 HeLa 细胞制成悬液并接
树脂后处理：DMF 洗涤 3 次，DCM 洗涤 3 次， 种到 96 孔板中（细胞密度约为 5×10 个/孔），于
4
MeOH 洗涤 3 次，DCM 洗涤 3 次，MeOH 洗涤洗涤 37 ℃，5% CO2的孵育环境中培养 12 h，加入 SiRho⁃
3 次，振摇5 min/次，洗涤后放入真空干燥器充分干燥。 GABA⁃KYC溶液（相当于细胞培养基中浓度为0、5、
在上述充分干燥的树脂中加入三氟乙酸（9.5 mL） 10、20、30、50 μmol/L），另设空白组（无细胞），每组
和三异丙基硅烷（0.5 mL），恒温26 ℃振摇2 h，抽滤， 设 6 个复孔，于培养箱中继续孵育 24 h，弃去上清
滤液保存待用。此步骤重复 2 次，合并 3 次切割所 液，加入100 μL无血清培养基和10 μL CCK⁃8溶液，
得滤液，减压浓缩至小体积，加入冰乙醚析出沉淀， 继续培养 1 h 后，在酶联免疫检测仪波长 450 nm 处
1
过滤干燥得粗品。溶解后用液相进行半制备。 H 测量各孔的吸光值。
NMR（400 MHz，DMSO⁃d6 ）δ：8.65（s，1H），8.00（dd， 1.2.2.3 外源性HClO细胞成像
J=11.0，8.0 Hz，2H），7.90（d，J=6.9 Hz，1H），7.83（d， 取处于对数生长期的 HeLa 细胞制成悬液，加
J=7.8 Hz，1H），7.76~7.56（m，5H），7.24（d，J=13.6 入到预先放置盖玻片的24孔板中，于37 ℃，5% CO2
Hz，2H），7.04~6.93（m，5H），6.72~6.27（m，6H），2.97 培养箱中培养12 h，弃去培养基，用PBS缓冲液清洗
（dd，J=16.0，5.4 Hz，3H），2.89（d，J=3.2 Hz，12H）， 1 次，加入不同浓度的次氯酸钠（相当于细胞培养基
