Page 25 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第11期 娄 芮，朱佳浩，茆 勇，等. miR⁃449c通过抑制c⁃Myc的表达抑制肺腺癌细胞周期进程［J］.
2023年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（11）：1494-1502 ·1497 ·

A B C
hsa⁃mir⁃1 181 ** *
hsa⁃mir⁃5 581 6 6
3
hsa⁃mir⁃4 802
hsa⁃mir⁃4 446 hsa⁃mir⁃449c
hsa⁃mir⁃4 442 hsa⁃mir⁃5 003 4 4
hsa⁃mir⁃1 237 hsa⁃mir⁃552 hsa⁃mir⁃494 低表达 miR⁃449c的表达量 miR⁃449c的表达量
Value） 2 hsa⁃mir⁃6 728 不显著 2 2

（ P hsa⁃mir⁃3 609 高表达
log10 hsa⁃mir⁃376a⁃2 0 0

1 Ⅲ/Ⅳ期 Ⅰ/Ⅱ期 淋巴结阳性 淋巴结阴性
（n=113） （n=37） （n=56） （n=90）

0
-2 -1 0 1
log2 （Fold Change）
D E
1.00 miR⁃449c高表达（n=175） 1.00 miR⁃449c高表达（n=296）
miR⁃449c低表达（n=116） miR⁃449c低表达（n=163）
0.75 0.75
DFS率 0.50 DSS率 0.50

0.25
P=0.012 0.25
P=0.011
0
0
0 25 50 75 100 125 0 30 60 90 120
时间（月） 时间（月）
A：火山图显示高复发风险组（n=6）与低复发风险组（n=30）之间差异表达的 miRNA，蓝点和红点分别表示显著低表达和显著高表达的
miRNA；B、C：箱式图显示miR⁃449c表达与肿瘤分期（B）和淋巴结状态（C）的关系；D、E：生存分析显示miR⁃449c表达与肺腺癌患者的DFS（D）
和DSS（E）的关系。两组比较，P < 0.05，P < 0.01。
*
**
图1 miR⁃449c的表达水平、miR⁃449c与临床病理特征的相关性和生存分析
Figure 1 The expression of miR⁃449c，correlation between miR⁃449c and clinicopathological features，and survival analysis

分析了多种体细胞突变。引起复发和转移高风险 达较低的 PC9、A549 和 HCC827 细胞株进行下一步
的前 10 个突变基因是：TP53（39%）、TTN（36%）、 研究。
MUC16（34%）、CSMD3（33%）、RYR2（30%）、ZFHX4 2.4 miR⁃449c上调导致肺腺癌细胞周期阻滞
（29%）、LRP1B（26%）、USH2A（26%）、SPTA1（23%） 将 miR⁃449c⁃mimic 和 miR⁃NC 分别转染 PC9、
和 XIRP2（23%）（图 2A）。 A549 和 HCC827 细胞后，RT⁃PCR 结果均显示 miR⁃
显著富集的信号通路（图 2B），包括细胞周期、 449c⁃mimic 组细胞 miR⁃449c 表达量显著高于 miR⁃
ECM 受体相互作用、黏着斑、同源重组、紧密连接。 NC 组（P 均< 0.001），说明 miR⁃449c 均成功过表达
miR⁃449c 的靶基因预测及通路（图 2C）和功能分析 （图 4A~C）。CCK⁃8实验结果表明miR⁃449c过表达
结果（图 2D）表明肺腺癌中miR⁃449c可能通过靶向 显 著 抑 制 了 PC9、A549 和 HCC827 细 胞 增 殖（图
c⁃Myc 和 CDK6 参与调控细胞周期，靶向 MET 基因 4D~F）。
参与细胞凋亡。 进一步取 PC9 和 A549 细胞系进行流式细胞术

2.3 miR⁃449c在肺腺癌组织和细胞中低表达 分析，结果显示两株细胞中，miR⁃449c⁃mimic组与对
通过RT⁃PCR检测了11对肺腺癌组织和癌旁组 照 miR⁃NC 组间细胞凋亡率均未见显著差异（图

织中 miR⁃449c 的表达，发现肺腺癌组织中的 miR⁃ 4G）；而细胞周期结果显示两株细胞中 miR⁃449c⁃
449c 水平显著低于癌旁组织（图 3A）。与该结果一 mimic组G1期细胞均显著增加，S期细胞均显著减少
致，miR⁃449c 在肺腺癌细胞系 PC9、A549、HCC827、 （图 4H），说明miR⁃449c 过表达后PC9和A549细胞
H1650 和 H358 中的表达均较低（图 3B）。选取表 被阻滞于G1期。