Page 23 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第11期 娄 芮，朱佳浩，茆 勇，等. miR⁃449c通过抑制c⁃Myc的表达抑制肺腺癌细胞周期进程［J］.
2023年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（11）：1494-1502 ·1495 ·

Overexpression of miR ⁃ 449c inhibited lung adenocarcinoma cell proliferation，resulted in cell cycle arrest in G1 phase，and
downregulated the expression of c⁃Myc and its downstream cyclins. Overexpression of c⁃Myc could partially counteract the inhibition of
cyclin by miR⁃449c. Overexpression of miR⁃449c could also partially counteract the up⁃regulation of cyclin expression by c⁃Myc.
Conclusion：Lung adenocarcinoma patients with low expression of miR⁃449c have a poor prognosis. Overexpression of miR⁃449c can
regulate the lung adenocarcinoma cell cycle by downregulating c⁃Myc to inhibit the proliferation of lung adenocarcinoma cells. The
results suggest that miR⁃449c may be one of the potential therapeutic targets for lung adenocarcinoma.
［Key words］ lung adenocarcinoma；miR⁃449c；cell cycle；c⁃Myc
［J Nanjing Med Univ，2023，43（11）：1494⁃1502］

肺癌是全球最常见、死亡率最高的恶性肿瘤 ［1-4］ 。 所细胞资源中心。
肺腺癌是肺癌中最常见的一个组织学亚型，约占所 1.1.2 主要试剂
［2，5-6］
有肺癌的 40% 。尽管目前有手术、化疗、放疗、 miR⁃449c 和 U6 引物、miR⁃449c 模拟物（miR⁃
靶向治疗、免疫治疗等多种治疗手段，但仍有多数 449c⁃mimic）及其阴性对照（miR⁃NC）（广州市锐博
肺腺癌患者因治疗后出现肿瘤进展而死亡 ［7-11］ 。因 生物科技有限公司），c⁃Myc、CDK6、MET 和β⁃actin
此，阐明肺腺癌发生发展的分子机制和确定新的治 引物（Life Technologies 公司，美国），c⁃Myc 过表达
疗靶点非常重要。 质粒（pENTER⁃c⁃Myc）及 其 阴 性 对 照（pENTER）
microRNA（miRNA）是一类长度为 17~24 nt 的 （Vigene Biosciences 公司，美国）；转染试剂 Lipo⁃
短链、非编码 RNA，通过与 mRNA 内的互补序列结 fectamine 3000及提取细胞RNA的TRIzol试剂（Invit⁃
合，在转录过程后调节基因的表达 ［12-13］ 。miRNA 可 rogen 公司，美国），Prime⁃Script RT 试剂（TaKaRa 公
以调节多种正常生理过程以及调控恶性肿瘤的发 司，日本），SYBR Select Master Mix 试剂、NuPAGE
生发展 ［14-15］ 。大量研究证明 miRNA 在肺癌中发挥 10% Bis⁃Tris 凝胶（Life Technologies 公司，美国）；
着重要作用，如 miR⁃205 能够下调 COMMD1 基因促 CCK⁃8 试剂盒、RIPA 缓冲液、BCA 蛋白质测定试剂
进肺腺癌生长 ［16］ ，miR⁃218通过调节Slug/ZEB2 信号 盒、ECL Plus试剂盒（上海碧云天生物技术公司）；兔
通路促进肺腺癌转移 ［17］ ，miR⁃483⁃3p通过靶向整合 c⁃Myc 多克隆抗体、兔 CDK6 多克隆抗体、兔 MET 多
素β3 促进表皮生长因子受体突变的非小细胞肺癌 克隆抗体、兔 Cyclin D1 多克隆抗体、兔 Cyclin D2 多
产生获得性吉非替尼耐药 ［18］ ，但关于miR⁃449c在肺 克隆抗体、兔Cyclin E2多克隆抗体、羊抗兔IgG⁃HRP
腺癌中的报道仍然有限。本研究通过生物信息学 二抗（Cell Signaling Technology公司，美国），兔β⁃actin
分析揭示了miR⁃449c在肺腺癌中的作用，并探索了 多克隆抗体（Bioworld 公司，美国）；FITC Annexin V
miR⁃449c对肺腺癌细胞株生长、细胞周期和凋亡以 凋亡检测试剂盒（BD公司，美国）。
及相关基因表达的调控，旨在探讨miR⁃449c对肺腺 1.2 方法
癌发生发展的影响，并初步分析其可能机制。 1.2.1 差异表达基因筛选
利用The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库获
1 材料和方法
得520个肺腺癌组织和 46 个癌旁组织的 miRNA 表
1.1 材料 达数据和相应的临床信息，分析时剔除存在缺失
1.1.1 组织标本和细胞系 数据的病例。本研究将半年内复发患者定义为高复
11 对肺腺癌组织（均经病理学确诊）及癌旁组 发风险组［无病生存期（disease free survival，DFS）≤
织（距肺癌组织 5 cm 以外的肺组织）取自南京医科 6 个月］，5年内无复发的患者定义为低复发风险组
大学附属肿瘤医院，于2011年1月10日—12月15日 （DFS>60个月），利用R软件的Limma包筛选出两组
在手术时采集。本研究得到了南京医科大学伦理 差异表达的 miRNA（differentially expressed miRNA，
委员会的批准［南医大伦审（2018）067 号］，所有患 DEM），筛选标准为P < 0.05且|log2FC| > 1 。
［19］
者均在手术前签署知情同意书，同意病理标本供实 1.2.2 miR⁃449c 与临床病理特征的相关性分析及
验 研 究 使 用 。 肺 腺 癌 细 胞 PC9、A549、HCC827、 生存分析
H1650 和 H358 购自中国科学院上海生命科学研究 利用 R 软件分析 11 例肺腺癌患者 miR⁃449c 表