Page 18 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第11期
·1490 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年11月

A B 2.0 *
Gas6 mRNA相对表达水平 1.5

1.0
0.5
0
正常乳腺组织 乳腺癌组织
（n=13） （n=12）

C D E
8 P=0.003 P=0.034 8 P＜0.001
R=0.22 R=0.28 7 R=0.4
7
TPM ） 6 （ STAT1 TPM ） 7 6 6
（ STAT1 5 5 （ STAT1 TPM ） 5

log2 4 log2 4 log2 4
3
3
2
3
4 5 6 7 2 4 6 8 2 3 4 5 6
log2 （Gas6 TPM） log2 （Gas6 TPM） log2 （GAS6 TPM）
A：乳腺癌的基因聚类分析结果；B：Gas6在乳腺癌组织中高表达；两组比较，P＜0.05；C：STAT1与Gas6在嗜铬细胞瘤和副神经节瘤中有
*
正相关趋势；D：STAT1与Gas6在子宫肉瘤中有正相关趋势；E：STAT1与Gas6在眼部黑色素瘤中有正相关趋势。
图2 生物信息分析结果
Figure 2 Results of the bioinformatic analysis

HEK⁃293T细胞进行ChIP实验，结果表明：STAT1抗 比，pGas6⁃1450 组与 pGas6⁃1450 mut1 组在敲低或
体可沉淀结合在Gas6启动子上的蛋白，而阴性对照 过表达 STAT1 后相对萤光素酶活性明显降低或升
抗体 IgG 不能沉淀结合该启动子的蛋白，即转录因 高（P＜0.05，P＜0.05），而 pGas6⁃1450 mut2 组 与
子STAT1在Gas6启动子上有结合位点（图3）。 pGas6⁃1450 mut1+2组在敲低或过表达STAT1后相对
2.3 点突变对人 Gas6 启动子活性的影响及 STAT1 萤光素酶活性的变化差异无统计学意义（图4B、C）。
对Gas6启动子活性的影响 2.4 STAT1在mRNA水平对人Gas6基因的调控
将pGas6⁃1450与pGas6⁃1450 mut进行测序并鉴 为探究STAT1对人Gas6 mRNA表达的调控，在
定，结果显示与目标序列一致，表明含人 Gas6 启动 工具细胞 HEK⁃293T 中分别敲低和过表达 STAT1，
子及STAT1 结合位点突变启动子的萤光素酶报告 并通过 qRT⁃PCR 检测 STAT1 的敲低效率和过表
基因质粒构建成功。在工具细胞 HEK⁃293T 中进 达效率，同时检测敲低 STAT1 与过表达 STAT1 后

行双萤光素酶报告基因实验，结果表明：与 pGas6⁃ Gas6 mRNA 表达的变化。结果表明：与 siNC 组相
1450 组相比，pGas6⁃1450 mut1组的相对萤光素酶活 比 ，siSTAT1 组 STAT1 mRNA 表达显著降低（P＜
性变化无统计学意义，而 pGas6⁃1450 mut2 组与 0.01），同时 Gas6 mRNA 表达明显降低（P＜0.05，图
pGas6⁃1450 mut1+2 组的相对萤光素酶活性均明显 5A）；与 pENTER 组相比，pENTER⁃STAT1 组 STAT1
降低（P＜0.01，P＜0.05，图 4A）；与相应对照组相 mRNA表达显著升高（P＜0.01），同时Gas6 mRNA表