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第43卷第11期 颜 凤，邱佳韵，庄丽丽，等. 转录因子STAT1对癌症相关基因Gas6的调控研究［J］.
2023年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（11）：1487-1493 ·1491 ·

A B 10 *** C D 5 **
Input （ 2% ）
Anti⁃STAT1
阳性对照
Anti⁃IgG Anti⁃STAT1 阳性对照 Marker 8 6 Marker Input （ 2% ） Anti⁃IgG 4 3
200 bp 相对信号富集 4 相对信号富集 2
115 bp 200 bp 123 bp
100 bp 2 100 bp 1
0 0
Anti⁃IgG Anti⁃IgG
Anti⁃STAT1
Anti⁃STAT1
A：使用引物Gas6⁃1 PCR后的琼脂糖凝胶电泳结果图；B：A图中阴性对照组Anti⁃IgG与实验组Anti⁃STAT1的相对信号富集结果；C：使用引
物Gas6⁃2 PCR后的琼脂糖凝胶电泳结果图；D：C图中阴性对照组Anti⁃IgG与实验组Anti⁃STAT1的相对信号富集结果。两组比较，P＜0.01，
**
P＜0.001（n=3）。
***
图3 STAT1可与Gas6启动子结合
Figure 3 STAT1 can bind to the promoter of Gas6

A 1.5 ** * B 1.5 * siNC C 2.0 ** * pENTER
相对萤光素酶活性 1.0 相对萤光素酶活性 1.0 * 相对萤光素酶活性 1.5
pENTER⁃STAT1
siSTAT1
1.0
0.5
0.5
0.5
0 0 0
pGas6⁃1450 mut1
pGas6⁃1450 mut1
pGas6⁃1450 mut1+2
pGas6⁃1450 mut1+2
pGas6⁃1450 mut1
pGas6⁃1450 mut1+2
pGas6⁃1450 pGas6⁃1450 mut2 pGas6⁃1450 pGas6⁃1450 mut2 pGas6⁃1450 pGas6⁃1450 mut2
A：采用双萤光素酶报告基因实验检测转染pGas6⁃1450或pGas6⁃1450 mut的HEK⁃293T细胞中相应启动子的活性；B：采用双萤光素酶报
告基因技术检测共转染siRNA与pGas6⁃1450或pGas6⁃1450 mut的HEK⁃293T细胞中相应启动子的活性变化；C：采用双萤光素酶报告基因技术
检测共转染过表达质粒与pGas6⁃1450或pGas6⁃1450 mut的HEK⁃293T细胞中相应启动子的活性变化。两组比较，P＜0.05，P＜0.01（n=3）。
**
*
图4 点突变对人Gas6启动子活性的影响及敲低或过表达STAT1对Gas6启动子活性的影响
Figure 4 Effect of mutations on human Gas6 promoter activity and the effect of knockdown or overexpression of STAT1
on Gas6 promoter activity

达明显升高（P＜0.05，图5B）。 究通过 ChIP 实验证明转录因子 STAT1 可与 Gas6 启
2.5 STAT1在蛋白水平对人Gas6基因的调控 动子结合，同时对可能的潜在结合位点进行点突
为探究 STAT1 在蛋白水平对 Gas6 基因表达的 变，明确转录因子STAT1在Gas6启动子上的结合位
调 控 ，在 HEK ⁃ 293T 细 胞 中 分 别 敲 低 和 过 表 达 点，同时通过敲低和过表达STAT1证明其在转录水
STAT1，通过Western blot 检测 STAT1 敲低效率和过 平对Gas6基因进行调控。
表达效率及 Gas6 蛋白表达的改变情况。结果表 生 长 抑 制 特 异 性 基 因（growth arrest ⁃ specific
明：与 siNC 组相比，siSTAT1 组 STAT1 与 Gas6 的蛋 transcripts，GAS）家族成员众多，在细胞生长、分化、
白表达均明显降低（P＜0.05，P＜0.05，图 6A、B）； 凋亡、细胞周期调控等方面具有重要功能。Gas6基
与 pENTER 组相比，pSTAT1 组 STAT1 与 Gas6 的蛋 因是GAS基因家族中的一员，它编码一种可刺激细
白表达均明显升高（P＜0.01，P＜0.05，图6C、D）。 胞增殖的蛋白质并在多种癌症中过度表达，被认为
是预后不良的标志物之一。Gas6还与肥胖、肝纤维
3 讨 论
化、静脉血栓栓塞、系统性红斑狼疮、肾小球肾炎、
真核生物基因的表达调控是多层次的，包括 慢性肾脏病、先兆子痫等疾病相关。大量研究表明
转录水平、转录后水平、翻译水平、翻译后水平的 Gas6/Axl与多种癌症的侵袭性相关，包括乳腺癌、肺
调控 ［12］ ，是生物体内细胞分化、形态发生和个体发 癌、胃肠癌、头颈部癌、肝细胞癌、肾细胞癌、胶质
育的分子基础。基因转录水平的调控对研究相关 瘤、胰腺癌、甲状腺癌等，并在多种肉瘤、急性髓系
疾病的分子机制及其预防、诊断、治疗等具有重要 白血病和其他血液系统恶性肿瘤中过表达 ［14］ 。
意义 ［13］ 。而目前对 Gas6 基因的研究主要集中在蛋 Gas6 蛋白通过激活癌细胞上的 Axl 受体，调节肿瘤
白水平，关于Gas6基因启动子的研究却很少。本研 微环境各组分（包括癌细胞、内皮细胞和免疫细胞）