Page 28 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第11期
·1500 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年11月

A B D
miR⁃NC 1.5 miR⁃NC miR⁃NC + PC9 - + A549 -
mRNA相对表达量 1.0 *** ** MET mRNA相对表达量 1.0 *** ** miR⁃449c⁃mimic - + - + 45 kDa
miR⁃449c⁃mimic
miR⁃449c⁃mimic
1.5
Actin
c⁃Myc
57~65 kDa
170 kDa
c⁃Myc 0.5 0 0.5 0 CDK6 36 kDa
MET
140 kDa
A549 PC9 A549 PC9 Cyclin E2 48 kDa
C 3 miR⁃NC Cyclin D2 31 kDa
mRNA相对表达量 2 *** ***
miR⁃449c⁃mimic
36 kDa
Cyclin D1

CDK6 1 0
A549 PC9
A：RT⁃PCR检测miR⁃449c过表达后c⁃Myc mRNA水平的变化；B：RT⁃PCR检测miR⁃449c过表达后MET mRNA水平的变化；C：RT⁃PCR检测
miR⁃449c过表达后CDK6 mRNA水平的变化；D：Western blot检测miR⁃449c过表达后c⁃Myc、CDK6、MET 以及细胞周期蛋白表达的变化。两组
比较，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
**
***
图5 miR⁃449c调控c⁃Myc、CDK6和MET基因并影响周期蛋白表达
Figure 5 miR⁃449c regulates c⁃Myc，CDK6 and MET and affects cyclin expression
此选择c⁃Myc进行下一步研究。 和pENTER⁃c⁃Myc的细胞中仅Cyclin E2的表达显著
2.6 共转染对肺腺癌细胞周期蛋白的影响 升高，说明 c⁃Myc 过表达逆转了 miR⁃449c 过表达引
将 c⁃Myc 质粒和 miR⁃449c⁃mimic 共转染到 PC9 起的Cyclin E2的下调。
细胞中，RT⁃PCR 结果显示转染 miR⁃449c⁃mimic 后
3 讨 论
上调 c⁃Myc 降低了 miR⁃449c 的过表达水平（图
6A）。Western blot 结果（图 6B）显示与转染miR⁃NC miRNA 在不同类型肿瘤中受到多系统调控，
和 pENTER 的对照组相比，c⁃Myc 单基因过表达后， miRNA失调不可避免地会改变细胞中的mRNA谱，
Cyclin D1、Cyclin D2 和 Cyclin E2 的表达显著上调， 进一步通过反馈回路影响miRNA的表达和功能，最
共转染miR⁃449c⁃mimic后逆转了c⁃Myc 引起的细胞 终影响其靶标mRNA的基因表达调控网络 ［15，22］ 。
周期蛋白表达量的上调；然而与共转染 miR⁃449c⁃ 本研究通过生物信息学分析发现高复发风险
mimic和pENTER的细胞相比，转染miR⁃449c⁃mimic 肺腺癌患者的 miR⁃449c 表达水平显著低于低复发

A B
miR⁃NC + - + -
500 * miR⁃449c⁃mimic - + - + - - + + - +
450
miR⁃449c的相对表达量 350 5 4 Cyclin E2 48 kDa
+
pENTER
400
pENTER⁃c⁃Myc
-
300
250
31 kDa
Cyclin D2
1 3 2 Cyclin D1 36 kDa
c⁃Myc
0 57~65 kDa
miR⁃NC + + - -
miR⁃449c⁃mimic - - + +
pENTER + - + - Actin 45 kDa
pENTER⁃c⁃Myc - + - +
A：RT⁃PCT 检测PC9细胞转染miR⁃449c或/和c⁃Myc过表达质粒后miR⁃449c mRNA 水平的变化；B：Western blot 检测c⁃Myc以及细胞周期
蛋白Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin E2的表达。两组比较，P < 0.05（n=3）。
*
图6 miR⁃449c和c⁃Myc共转染结果
Figure 6 Results of co⁃transfection of miR⁃449c and c⁃Myc