Page 22 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第12期
·1638 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年12月
0.2% DNFB 溶液刺激。此后每隔 2 d 给予小鼠颈背 下检测吸光度并计算炎症因子浓度。
部同样的刺激进行敏化,持续2周。 1.2.8 蛋白免疫印迹(Western blot)试验
1.2.3 动物分组与处理 用含有蛋白酶抑制剂/磷酸酶抑制剂的RIPA裂
在白鲜皮醇提物抑制皮炎引起的慢性瘙痒研 解液提取造模区域皮肤组织蛋白质,BCA试剂盒测
究中,小鼠随机分为空白对照组、模型组、白鲜皮醇 定蛋白浓度。每组加 30 μg 蛋白进行 SDS⁃PAGE 电
提物组,每组6只。对照组按上述造模方法,采用不 泳和转膜,5%的脱脂奶粉溶液封闭2 h,加入相应的
含DNFB 的丙酮/橄榄油混悬液进行刺激,不予药物 一抗4 ℃孵育过夜,TBST洗膜3次后,二抗室温孵育
治疗。模型组和白鲜皮醇提物组均按上述方法进 2 h。ECL显影并成像,使用Image J软件对所有条带
行模型制备,模型组采用羧甲基纤维素钠(carboxy⁃ 进行灰度值分析。
methylcellulose sodium,CMC⁃Na)灌胃治疗,白鲜皮 1.3 统计学方法
醇提物组给予白鲜皮醇提物(300 mg/kg,溶于 0.5% 使用 Prism 8 软件用于所有的数据分析和统计
CMC⁃Na溶液中)灌胃治疗,均每天1次。 图形绘制,数据以均值±标准差(x ± s)表示。采用非
在白鲜皮活性成分的抗皮炎作用研究中,小鼠 配对 Student’s t 检验或单因素方差分析(ANOVA)
随机分为模型组、白鲜碱组、黄柏酮组、梣酮组、地 分析组间差异,使用Dunnett多重比较检验进行事后
塞米松组(每组 8 只),均采用上述方法进行 AD 小 分析。P < 0.05为差异有统计学意义。
鼠模型制备。模型组采用 CMC⁃Na 灌胃治疗,其余
2 结 果
组分别给予白鲜碱(10 mg/kg)、黄柏酮(10 mg/kg)、
梣酮(10 mg/kg)、地塞米松(1 mg/kg)灌胃治疗,每天 2.1 白鲜皮乙醇提取物对AD小鼠慢性瘙痒的影响
1次,持续14 d。 与对照组相比,AD 小鼠抓痒次数不断增加,呈
1.2.4 抓痒次数统计 现了强烈的搔抓行为,而给予白鲜皮醇提取物干
每天早晨固定时间在安静环境下利用高清摄 预,能明显抑制特应性皮炎小鼠的抓痒。在造模第
像机进行小鼠抓痒行为学录制,将小鼠后足抬起抓 14天,空白对照组、模型组、白鲜皮醇提物组的抓痒
挠颈背部的行为记作1次有效的抓挠。由1名不知 次数分别为(34.3±5.7)次、(243.7±47.5)次、(119.3±
晓实验分组的研究者统计每5 min间隔内小鼠抓痒 33.0)次,差异有统计学意义(图1)。
次数,共统计30 min。 2.2 黄柏酮、白鲜碱、梣酮对AD小鼠引起的慢性瘙
1.2.5 皮损评分及体重变化评估 痒的影响
每 2 d 对小鼠颈背部的皮肤损害情况进行 1 次 造模第14天,白鲜碱组、梣酮组、地塞米松组都
评分。以小鼠皮肤损害的特征性症状(红斑、水肿、 明显抑制了 AD 小鼠的强烈搔抓,但黄柏酮组的抓
鳞屑/干燥、剥脱/糜烂、出血)为评分的基础,分为 0 痒次数仍维持在较高水平,与模型组相比,差异无
分(无症状)、1分(轻度症状)、2分(中度症状)、3分 统计学意义(图2)。
(重度症状)3个等级 [19] 。每2 d称量1次小鼠体重, 2.3 黄柏酮、白鲜碱、梣酮对小鼠AD小鼠皮炎症状
监测造模期间小鼠体重变化。在造模第 14 天采用 的影响
高分辨率照相机拍摄小鼠颈背部皮损照片。 造模第 14 天,模型组小鼠的平均皮损评分为
1.2.6 组织病理学分析 (2.60±0.24)分,黄柏酮组小鼠的平均皮损评分为
小鼠颈背部造模区域皮肤,4%多聚甲醛溶液中 (2.71±0.18)分,两组均出现严重的结痂、剥脱、红斑
固定过夜,蔗糖梯度脱水,包埋后采用莱卡冰冻切 等症状。而白鲜碱组[(1.50±0.16)分]与梣酮组
片机切片,厚度10 μm。进行苏木素⁃伊红(hematox⁃ [(1.22±0.22)分]小鼠的皮损评分明显降低,地塞米
ylin⁃eosin,HE)和甲苯胺蓝染色,观察皮损区域皮肤 松组小鼠的皮损评分[(1.62±0.26)分]也有一定程
表皮厚度和肥大细胞数目变化。 度的改善(图 3A~C)。此外,模型组、黄柏酮组、地
1.2.7 ELISA 塞米松组小鼠体重增幅略小于白鲜碱和梣酮组(图
切取 0.5 cm×0.5 cm 大小的皮肤组织,加入 PBS 3D~E)。
缓冲液,充分匀浆离心后获得组织蛋白上清液,使 2.4 黄柏酮、白鲜碱、梣酮对AD小鼠组织病理学变
用 BCA 蛋白定量试剂盒定量蛋白浓度,采用 ELISA 化的影响
试剂盒检测IL⁃4、IL⁃31、IL⁃10水平。在450 nm波长 造模第14天,模型组小鼠的表皮厚度显著增加