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第43卷第12期 杨妞妞,邵海峰,邓嘉林,等. 白鲜皮主要药效成分白鲜碱、黄柏酮、梣酮的抗皮炎作用比较及
2023年12月 机制研究[J]. 南京医科大学学报(自然科学版),2023,43(12):1636-1642,1649 ·1637 ·
cortex dictamnitoin exerting anti⁃dermatitis effect.
[Key words] cortex dictamni;atopic dermatitis;dictamnine;fraxinellone;obacunone;JAK1⁃STAT3/STAT6
[J Nanjing Med Univ,2023,43(12):1636⁃1642,1649]
特应性皮炎(atopicdermatitis,AD)是一种常见 较医学中心,动物饲养于SPF级动物实验房中,温度
的以皮肤屏障功能破坏及持续性瘙痒症状为特征 控制在(22±2)℃,12 h 光照/黑暗循环,自由饮食。
的慢性复发性的炎症性皮肤疾病,影响全球 10%~ 所有动物的饲养及实验程序均按照扬州大学动物
30%的儿童和2%~10%的成人,全球流行率接近2.3 护理与使用委员会制定的指南进行,并获得扬州大
亿例,严重影响患者的健康和生活质量,并加重其 学医学院伦理委员会批准(编号:YXYLL⁃2022⁃52)。
[1]
经济负担 。多项研究表明:Th2细胞介导的免疫、 白鲜皮饮片(生药,批号:211102,苏州市天灵
皮肤屏障功能障碍和瘙痒是导致AD“抓—痒—抓” 中药饮片有限公司),白鲜碱、梣酮、黄柏酮(成都曼
恶性循环的重要因素,白介素(interleukin,IL)⁃31、 斯特生物科技有限公司),2,4⁃二硝基氟苯(2,4⁃di⁃
IL⁃4、IL⁃13、IL⁃5、胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic nitrofluorobenzene,DNFB)(上海麦克林生化科技股
stromal lymphopoietin,TSLP)等细胞因子在 AD 引起 份有限公司),醋酸地塞米松片(dexamethasone,
的皮肤炎症和瘙痒的病理进展过程中发挥重要作 DEX)(0.75 mg/片,批号:2005002,许昌百正药业股
用 。Janus 激酶(janus kinase,JAK)⁃信号转导和转 份有限公司);小鼠IL⁃4、IL⁃10 、IL⁃31酶联免疫吸附
[2]
录激活因子(signal transducer and activator of tran⁃ 试验(enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA)试
scription,STAT)通路参与了上述多数细胞炎症因子 剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);兔抗GAPDH
在 AD 中的免疫应答,此外,JAK⁃STAT 还参与调节 多克隆抗体(杭州贤至生物科技公司);兔单克隆抗
AD表皮屏障功能及瘙痒信号转导 [3-4] 。因此JAK信 体JAK1、p⁃JAK1、STAT3、p⁃STAT3、STAT6、p⁃STAT6
号通路可能是治疗皮炎的重要靶点。 和山羊抗兔二抗(Abcam 公司,美国)。真空旋转蒸
白鲜皮是芸香科植物白鲜的干燥根皮,具有清 发仪(上海靳澜制造公司),恒温干燥箱(上海一恒
热祛湿、祛风解毒的作用,在临床上被广泛用于治 公司),高清摄像机(型号HF10,佳能公司,日本),冰
疗哮喘、风湿、黄疸、冠状动脉粥样硬化以及湿疹、 冻切片机(型号 CM1950,Thermo 公司,美国),正置
荨麻疹、疥疮等多种疾病 。现代药理学研究表明, 光学显微镜(型号BX43,Olympus 公司,日本),多功
[5]
白鲜皮提取物具有抗炎、抗过敏、抗癌、抗氧化和保 能酶标仪(型号EnSpire,PerkinElmer公司,美国),垂
肝等作用 [6-7] ,但关于其止痒作用的实验室研究却很 直电泳仪(型号 164⁃5050)、凝胶成像系统(型号
少,尤其是白鲜皮主要活性成分中哪些能够在皮炎 ChemiDoc XRS)(Bio⁃Rad公司,美国)。
+
治疗中发挥抗炎止痒作用的研究鲜有报道。白鲜 1.2 方法
皮的主要成分有生物碱类、柠檬苦素类、香豆素类、 1.2.1 白鲜皮乙醇提取物的制备
甾体类及多糖等,其中,白鲜碱、黄柏酮、梣酮是衡量 将 1 kg 白鲜皮药材粉碎,加入 10 L 的 95%乙
白鲜皮药物质量的3种主要指标性成分 [8-9] 。白鲜碱 醇,在热回流提取系统中煮沸提取 2 次,每次 2 h。
具有抗炎、抗过敏、抗癌等作用 [10-11] ;梣酮具有抗炎、 然后将提取液混合、过滤并使用真空旋转系统蒸发浓
抗癌、抗氧化应激、抗纤维化等作用 [12-15] ;黄柏酮具有 缩,将浓缩液在恒温干燥箱烤箱中干燥烘干,共获得
抗氧化、抗炎、抗癌、抗高血糖和抗肥胖作用 [16-18] 。本 67.5 g 的白鲜皮乙醇提取物,提取率 6.75%。利用
研究旨在利用 AD 小鼠模型比较白鲜皮 3 种指标性 UPLC对白鲜皮醇提物主要成分进行鉴定和测定。
活性成分的抗炎止痒作用,并观察其对炎症因子及 1.2.2 建立特应性皮炎小鼠模型
JAK1⁃STAT3/STAT6 信号通路的影响,为白鲜皮活 在小鼠颈背部反复应用 DNFB 诱导 AD 小鼠模
性成分在临床的应用提供理论依据。 型,造模方法如图 1A 所示。提前 5 d 在小鼠腹部剃
毛(2 cm×2 cm),暴露腹部皮肤。2 d 后给予腹部剃
1 材料和方法
毛部位20 μL 0.5% DNFB 溶液(溶于4∶1的丙酮、橄
1.1 材料 榄油混合液),并对小鼠颈背部进行剃毛处理(2 cm×
6~8 周龄雄性 C57BL/6 小鼠购买于扬州大学比 2 cm)。3 d 后给予小鼠颈背部剃毛的区域 20 μL