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第43卷第2期 胡昊扬，许志强. 小鼠IL⁃3的原核表达条件优化及其促肥大细胞分化成熟的活性研究［J］.
2023年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（2）：179-186 ·183 ·

A B 16 ℃ 28 ℃ 37 ℃
A600=0.6 A600=0.8 M 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0
100
70
55
45
16 ℃ 28 ℃ 37 ℃ 16 ℃ 28 ℃ 37 ℃ 35
25
IPTG（mmol/L） 15
0.3 0.51.0 0.3 0.51.0 0.3 0.51.0 0.30.51.0 0.3 0.51.0 0.3 0.51.0
kDa
8 h of 16 h 8 h of 16 h
C D E
16 ℃ 28 ℃ 37 ℃ 16 ℃ 28 ℃ 37 ℃ 16 ℃ 28 ℃ 37 ℃
M 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 M 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 M 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0
100 100
70 100 70
55 70 55
45 55 45
35 45 35
25 35 25
25
15 15
15
kDa kDa
kDa
A：小鼠IL⁃3表达条件优化的参数设置；B：菌液吸光值为0.6时，加入不同浓度IPTG在不同温度下培养8 h后，目的蛋白的表达检测结果；
C：菌液吸光值为0.6时，加入不同浓度IPTG在不同温度下培养16 h后，目的蛋白的表达检测结果；D：菌液吸光值为0.8时，加入不同浓度IPTG
在不同温度下培养8 h后，目的蛋白的表达检测结果；E：菌液吸光值为0.8时，加入不同浓度IPTG在不同温度下培养16 h后，目的蛋白的表达
检测结果。箭头处所示为小鼠IL⁃3。
图2 小鼠IL⁃3蛋白的表达条件优化
Figure 2 Optimization of the prokaryotic expression of mouse IL⁃3

A B
A600=0.6 A600=0.6
80 000 16 ℃ 8 h 80 000 16 ℃ 16 h
IL⁃3表达情况 60 000 37 ℃ 8 h IL⁃3表达情况 60 000 37 ℃ 16 h
28 ℃ 16 h
28 ℃ 8 h
40 000
40 000
20 000
20 000
0 0
0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 IPTG（mmol/L） 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 IPTG（mmol/L）
C D
A600=0.8 A600=0.8
80 000 80 000
16 ℃ 8 h 60 000 16 ℃ 16 h
IL⁃3表达情况 40 000 37 ℃ 8 h IL⁃3表达情况 40 000 37 ℃ 16 h
28 ℃ 16 h
28 ℃ 8 h
60 000
20 000
20 000
0 0
0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 IPTG（mmol/L） 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 0.3 0.5 1.0 IPTG（mmol/L）
A~D：使用图像分析软件计算在不同参数条件下诱导表达小鼠IL⁃3在SDS⁃PAGE中条带面积强度。
图3 重组小鼠IL⁃3的表达情况分析
Figure 3 Analysis the protein content of recombinant mouse IL⁃3

白条带。根据BCA蛋白浓度测定结果，最终纯化的 性标志物FcεRI和CD117双阳性的细胞群计算该细
小鼠IL⁃3的浓度为0.08 mg/mL（图4D），其在反向色 胞群所占比例。结果显示，随着诱导培养时间从3周

谱中所测定的纯度＞85%，色谱峰保留时间：32.230 持续至5周，本研究中纯化的小鼠IL3配合商业SCF
（图4E）。 刺激组中FcεRI CD117 肥大细胞占比从23.3%（肥大
+
+
2.4 小鼠 IL⁃3 促进小鼠肥大细胞分化成熟的活性 细胞数量/流式细胞术圈定总细胞数量：3 702/15 920）
验证 增加至67.8%（肥大细胞数量/流式细胞术圈定总细胞
使用流式细胞仪检测原代培养的骨髓细胞中肥 数量：7 202/10 625）（图5A、B），高于阳性对照组中使
大细胞的分化情况，通过圈定分析肥大细胞表面特异 用商业化小鼠IL⁃3配合商业化小鼠SCF的培养参照