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第43卷第2期 居悦俊，郭展宏，王冠怡，等. LncRNA VIM⁃AS1通过miR⁃497⁃5p/FBXW7轴调控高糖环境下视网膜
2023年2月 内皮细胞的迁移和凋亡［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（2）：187-195，248 ·191 ·

A B C
1.5 ** 4 *** VIM⁃AS1 WT 5′ AGCAGGAUCUUAUUCUGCUG 3′
miR⁃497⁃5p 相对表达水平 1.0 miR⁃497⁃5p 相对表达水平 3 2 1 ** miR⁃497⁃5p 3′ UUUGGUGUCACACGACGAC 5′
3′
VIM⁃AS1 MUT 5′ AGCAGGAUCUUAUUGACGAC
0.5
0.0 0
inhibitor NC
vector OE⁃VIM⁃AS1
mimics NC
miR⁃497⁃5p mimics
miR⁃497⁃5p inhibitor

D mimics NC inhibitor NC
miR⁃497⁃5p mimics miR⁃497⁃5p inhibitor
1.5 2.0
*
荧光素酶活性 1.0 荧光素酶活性 1.0
**
1.5
0.5
0.5
0.0 0.0
VIM⁃AS1 WT VIM⁃AS1 MUT VIM⁃AS1 WT VIM⁃AS1 MUT
A：用vector或OE⁃VIM⁃AS1 转染ARPE⁃19细胞后qRT⁃PCR检测miR⁃497⁃5p 的表达；B：qRT⁃PCR评估miR⁃497⁃5p敲低和miR⁃497⁃5p过表
达后ARPE⁃19细胞中的miR⁃497⁃5p表达；C：lncRNA VIM⁃AS1和miR⁃497⁃5p之间的结合位点；D：采用双荧光素酶报告基因分析验证lncRNA
VIM⁃AS1和miR⁃497⁃5p之间的结合关系。两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
**
*
***
图2 LncRNA VIM⁃AS1通过海绵化miR⁃497⁃5p抑制miR⁃497⁃5p表达
Figure 2 LncRNA VIM⁃AS1 inhibits miR⁃497⁃5p expression by sponging miR⁃497⁃5p
CCK⁃8实验显示lncRNA VIM⁃AS1过表达促进了HG 4A）。免疫印迹检测结果显示显示，FBXW7的蛋白
处理的 ARPE⁃19 细胞的活性［（181.01±26.98）%，t= 表达因 miR⁃497⁃5p 过表达而显著降低（0.16±0.04，
4.621，P=0.009］。在miR⁃497⁃5p过表达后细胞活性 t=6.995，P=0.002）。miR⁃497⁃5p 敲低后 FBXW7 的
为（93.98±17.00）%（t=4.726，P=0.009），miR⁃497⁃5p 蛋 白 表 达 升 高（0.63 ± 0.06，t=2.822，P=0.048，图
过表达能恢复 lncRNA VIM⁃AS1 过表达的造成的细 4B）。使用生物信息学软件 miRanda 预测了 miR⁃
胞活性增加（图 3B）。与 HG+mimics NC+vector 组 497⁃5p和FBXW7之间的潜在结合位点（图 4C）。随
相比，HG+mimics NC+OE⁃VIM⁃AS1 组的流式细胞 后进行了双荧光素酶报告基因测定以验证miR⁃496
检测结果显示Q2及Q3象限中的细胞凋亡明显减少 ⁃5p和FBXW7之间的相互作用，将FBXW7的3′UTR
［（7.92±1.94）%，t=11.33，P < 0.001］。而转染 miR⁃ 区域构建至载体中报告基因luciferase 的后面，构建
497 ⁃ 5p mimics 后 细 胞 凋 亡 为（19.59 ± 3.44）%（t= 荧光素酶质粒。然后转染至细胞中，比较过表达或
5.528，P=0.005）。转染 miR⁃497⁃5p mimics 逆转了 干扰 miR⁃496⁃5p 后目的 FBXW7 的荧光素酶活性，
lncRNA VIM⁃AS1 过表达引起的细胞凋亡减少（图 发现过表达 miR⁃496⁃5p 后野生型 FBXW7（FBXW7⁃
3C）。此外，OE⁃VIM⁃AS1 转染导致 HG 处理的 WT）的荧光素酶活性明显下降（0.55±0.19，t=3.702，
ARPE⁃19 细胞迁移增加［（58.61±5.17）%，t=5.551， P=0.021）。同时敲低 miR⁃496⁃5p 后发现 FBXW7⁃
P=0.005］。而 miR⁃497⁃5p 过表达的细胞迁移为 WT 的 的 荧 光 素 酶 活 性 明 显 上 升（1.45 ± 0.11，t=
（42.03±7.75）%（t=3.083，P=0.036）。miR⁃497⁃5p 过 4.385，P=0.012）。miR⁃496⁃5p的过表达及敲低后突
表达能够逆转 lncRNA VIM⁃AS1 过表达引起的细胞 变型FBXW7的荧光素酶活性无显著改变（P > 0.05，
迁移增加（图 3D）。因此，miR⁃497⁃5p 过表达逆转 图 4D）。因此，FBXW7 是 miR⁃497⁃5p 的靶基因，过
lncRNA VIM⁃AS1 过表达对 HG 处理的 ARPE⁃19 细 表达miR⁃497⁃5p可以抑制 FBXW7的表达。
胞迁移和凋亡的影响。 2.5 敲低miR⁃497⁃5p可以调节FBXW7的表达促进

2.4 FBXW7是miR⁃497⁃5p的靶基因 ARPE⁃19细胞的增殖和迁移并抑制细胞凋亡
qRT⁃PCR 结果显示，FBXW7 的 mRNA 表达因 探索FBXW7对miR⁃497⁃5p介导的体外生物学
miR⁃497⁃5p 过表达而显著降低［（0.43±0.13），t= 功能的影响。qRT⁃PCR 检测显示，转染 sh⁃FBXW7
6.995，P=0.002］。miR⁃497⁃5p 敲低后 FBXW7 的 抑制了 FBXW7 mRNA 在 ARPE⁃19 细胞中的（0.36±
mRNA 表 达 升 高（2.16 ± 0.18，t=7.960，P=0.001，图 0.10，t=6.325，P=0.003，图 5A）。免疫印迹检测结果