Page 51 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第2期 居悦俊，郭展宏，王冠怡，等. LncRNA VIM⁃AS1通过miR⁃497⁃5p/FBXW7轴调控高糖环境下视网膜
2023年2月 内皮细胞的迁移和凋亡［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（2）：187-195，248 ·193 ·

A B
miR⁃497⁃5p inhibitor
25 ** 0.8 *
20
0.6
inhibitor NC
FBXW7 相对表达水平 15 ** mimics NC miR⁃497⁃5p mimics FBXW7 相对表达水平 0.4 **
10
0.0
0 5 FBXW7 79 kDa 0.0
mimics NC
miR⁃497⁃5p inhibitor
inhibitor NC
miR⁃497⁃5p mimics miR⁃497⁃5p mimics
inhibitor NC
miR⁃497⁃5p inhibitor
mimics NC
GAPDH
37 kDa
C D
mimics NC inhibitor NC
FBXW7⁃WT 5′ ccAAACUUAUUUAUGCUGCUa 3′ 1.5 miR⁃497⁃5p mimics 2.0 miR⁃497⁃5p inhibitor
*
荧光素酶活性 0.5 荧光素酶活性 0.5
miR⁃497⁃5p 3′ ugUUUGGUGUCACACGACGAc 5′ 1.0 * 1.5
FBXW7⁃MUT 5′ ccUUUGUUAUUAAACGACGAa 3′ 1.0
0.0 0.0
FBXW7⁃WT FBXW7⁃MUT FBXW7⁃WT FBXW7⁃MUT
A、B：qRT⁃PCR（A）和免疫印迹（B）检测miR⁃497⁃5下调和miR⁃497⁃5p过表达后，ARPE⁃19细胞中FBXW7的表达；C：miR⁃497⁃5p与FBXW7
的结合位点；D：双荧光素酶报告基因检测验证miR⁃497⁃5p与FBXW7的关系。两组比较，P < 0.05，P < 0.01（n=3）。
**
*
图4 FBXW7是miR⁃497⁃5p的靶基因
Figure 4 FBXW7 is the target gene of miR⁃497⁃5p

胁 ［20-21］ 。DR 常见于病程较长的 DM 患者 ，DR 是 凋亡。
［5］
DM相关失明的危险因素，中晚期DR可能会导致不 lncRNA 通过充当miRNA 的内源诱饵发挥竞争
可逆的病变。DR的发病机制尚不清楚，给DR的早 性内源性 RNA（competing endogenous RNA，ceRNA）
期诊断和治疗带来了困难。本研究发现 lncRNA 的作用，进而影响 miRNA 与其靶标的结合 ［27］ ，这被
VIM⁃AS1 通过调节 miR⁃497⁃5p/FBXW7 轴来介导 认为是阐明 lncRNA 分子机制的重要途径之一。据
DR中ARPE⁃19细胞的增殖、迁移和凋亡。 此，科学界提出了 ceRNA 假说，这被描述为一种新
视网膜上皮细胞是指滋养视网膜视觉细胞 ［22］ 。 的 RNA 调控机制 ［28］ 。据报道，lncRNA MIR497HG
视网膜上皮细胞增殖降低和细胞凋亡增加会导致 通过调节miR⁃128⁃3p来抑制HG处理的视网膜内皮
［23］
［29］
DR 患者视力丧失 。正如广泛报道的那样，视网膜 细胞的增殖和迁移 。然而，尚不清楚lncRNA VIM⁃
［24］
上皮细胞的增殖和凋亡受某些 lncRNA 的调节 。 AS1是否通过充当miRNA海绵在DR中发挥调节作
LncRNA AK077216可以抑制HG处理的ARPE⁃19细 用。本研究提出了一个新的ceRNA调控网络，其中
胞的凋亡 ［11］ 。此外，据报道 lncRNA MEG3 可抑制 lncRNA VIM⁃AS1海绵化了miR⁃497⁃5p。据报道，在
HG 处理的 ARPE⁃19 细胞的凋亡 ［25］ 。此外，lncRNA HG 条件下，miR⁃497 的表达与胰岛素水平一致 ［30］ 。
VIM⁃AS1 在 DM 和 DM 相关并发症中的作用之前已 此外，miR⁃497在糖尿病肾病患者和 HG处理的HK⁃
有报道 ［13-14，26］ ，但在DR中的调节功能尚不清楚。最 2 细胞中显著下调，miR⁃497 过表达可以抑制 HG 处
近一项研究表明，与其他 DM 患者相比，DR 患者的 理的 HK⁃2 细胞的焦亡 ［31］ 。更重要的是，据报道，
lncRNA VIM⁃AS1表达降低 ［14］ ，这表明 lncRNA VIM⁃ miR⁃497在DM大鼠的视网膜和HG处理的Müller细
AS1 有可能成为 DR 预后和治疗的新型生物标志 胞中显著上调 ［32］ ，表明 miR⁃497 在不同的糖尿病并
物。值得注意的是，据报道，lncRNA VIM⁃AS1 通过 发症中具有不同的表达。本研究证实了 miR⁃497⁃
miR⁃29 抑制 HG 诱导的人视网膜上皮细胞凋亡 。 5p 在 HG 处理的 ARPE⁃19 细胞中显著上调。此外，
［14］
然而，lncRNA VIM⁃AS1 调控DR进展的具体分子机 还发现 lncRNA VIM⁃AS1 可以通过直接靶向 miR⁃
制仍不清楚。本研究中，lncRNA VIM⁃AS1 在HG处 497⁃5p 负调控 ARPE⁃19 细胞中的 miR⁃497⁃5p。正
理的ARPE⁃19细胞中被下调，这与之前的研究完全 如预期的那样，miR⁃497⁃5p mimics 逆转了 lncRNA
一致 ［14］ 。此外，lncRNA VIM⁃AS1 过表达促进了 HG VIM⁃AS1过表达对HG诱导的ARPE⁃19细胞表型的
处理的ARPE⁃19细胞的增殖和迁移，并抑制了细胞 影响。本研究所有的结果都提供了支持DR中存在