Page 52 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第2期
·194 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年2月

A B C
1.5 ** FBXW7 sh⁃NC sh⁃FBXW7 79 kDa 0.6 * 250 ** * ***
200
FBXW7 相对表达水平 1.0 GAPDH 37 kDa FBXW7 相对表达水平 0.4 （ % ） 细胞活力 150
100
0.5
0.2
0.0 0.0 50 0
HG+inhibitor NC
HG+miR⁃497⁃5p
sh⁃NC sh⁃FBXW7 sh⁃NC sh⁃FBXW7
HG+miR⁃497⁃5p
HG+inhibitor inhibitor+sh⁃NC +sh⁃FBXW7
inhibitor+sh⁃FBXW7
NC+sh⁃NC

D
HG+inhibitor HG+miR⁃497⁃5p HG+inhibitor NC HG+miR⁃497⁃5p **
30
NC+sh⁃NC inhibitor+sh⁃NC +sh⁃FBXW7 inhibitor+sh⁃FBXW7 *
10 7 10 7 10 7 10 7
12.77% 8.14% 2.68% 4.02% 8.84% 8.66% 14.20% 9.44% （ % ） ***
10 6 10 6 10 6 10 6 20
10 5 10 5 10 5 10 5 细胞凋亡 10
10 4 10 4 10 4 10 4
PI 0
HG+miR⁃497⁃5p
HG+miR⁃497⁃5p
10 3 10 3 10 3 10 3
HG+inhibitor NC
NC+sh⁃NC
0 69.16% 9.93% 0 89.53% 3.77% 0 66.67% 15.83% 0 66.37% 9.99%
6
2
3
3
3
4
5
4
6
5
2
6
4
5
2
4
2
3
6
5
10 10 10 10 10 10 7 10 10 10 10 10 10 7 10 10 10 10 10 10 7 10 10 10 10 10 10 7 HG+inhibitor inhibitor+sh⁃NC +sh⁃FBXW7
Annexin V inhibitor+sh⁃FBXW7
E HG+inhibitor HG+miR⁃497⁃5p HG+inhibitor NC HG+miR⁃497⁃5p
NC+sh⁃NC inhibitor+sh⁃NC +sh⁃FBXW7 inhibitor+sh⁃FBXW7
*
80 * *
（ % ） 60
细胞迁移 20
h
0 40
0
HG+miR⁃497⁃5p
HG+miR⁃497⁃5p
HG+inhibitor HG+inhibitor NC
+sh⁃FBXW7
NC+sh⁃NC
h
24 inhibitor+sh⁃NC inhibitor+sh⁃FBXW7
A、B：用sh⁃NC或sh⁃FBXW7转染ARPE⁃19细胞，qRT⁃PCR（A）和蛋白印迹法（B）检测FBXW7在细胞中的表达；C：CCK⁃8实验检测细胞活
力；D：采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况；E：伤口愈合试验检测细胞迁移情况。两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
*
**
***
图5 敲低miR⁃497⁃5p可以调节FBXW7的表达促进ARPE⁃19细胞的增殖和迁移并抑制细胞凋亡
Figure 5 Knockdown of miR⁃497⁃5p can regulate the expression of FBXW7，promote the proliferation and migration of
ARPE⁃19 cells and inhibit apoptosis
lncRNA VIM⁃AS1/miR⁃497⁃5p 调节轴的证据。 FBXW7 调节靶蛋白泛素化和降解，FBXW7 的底物
众所周知，失调的miRNA结合靶mRNA来抑制 包括几种广泛研究的癌蛋白，例如 MYC、Notch、哺
基因表达，从而调控 DR 进展 ［33-34］ 。因此，本研究旨 乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamy⁃
在探索 miR⁃497⁃5p 在调节 DR 进展中的下游靶点。 cin，mTOR，mTOR），FBXW7与底物构建调控网络，可
FBXW7 作为胎球蛋白 A 的 E3 泛素连接酶，参与维 以调节细胞的增殖、凋亡及转移 ［36］ 。FBXW7 敲低消
持葡萄糖稳态，其在肥胖患者肝脏中的表达对葡萄 除了 miR⁃497⁃5p 抑制 ARPE⁃19 细胞生长的调节。
糖代谢具有多种有益作用；同时，敲除正常肝脏中的 因此，lncRNA VIM⁃AS1/miR⁃497⁃5p/FBXW7 轴可能
［35］
FBXW7会导致葡萄糖稳态受损 。更重要的是，据 是DR发展的关键参与者。
报道，FBXW7 可抑制 DR 中的血管生成 ［19］ 。本研 本研究证明了 lncRNA VIM⁃AS1 通过海绵化
究发现 HG 处理的 ARPE⁃19 细胞中 FBXW7 的表达 miR⁃497⁃5p 上调 FBXW7。重要的是，lncRNA VIM⁃
显著降低。FBXW7 是 miR⁃497⁃5p 的直接靶标， AS1 的过表达促进了HG处理的ARPE⁃19细胞的增