Page 48 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第2期
·190 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年2月

绵化miR⁃497⁃5p抑制miR⁃497⁃5p的表达 mimics/inhibitor 在与 lncRNA VIM⁃AS1⁃wt 质粒共转
众所周知，lncRNA 通过充当 miRNA 的海绵来 染后抑制/提高了荧光素酶活性（0.54±0.09）/（1.53±
实现生物学功能（即lncRNA通过与miRNA结合，减 0.21），t值分别为5.541及4.228，P值分别为0.005及
弱 miRNA 对靶基因的沉默，从而对 miRNA 的靶基 0.013。共转染 lncRNA VIM⁃AS1⁃mut 载体后没有发
因进行调控）。本研究发现在 lncRNA VIM⁃AS1 过 生显著性影响（P > 0.05，图 2D）。因此，lncRNA
表达后，ARPE⁃19细胞中miR⁃497⁃5p的表达显著降 VIM⁃AS1 靶向 miR⁃497⁃5p 以负向调节 miR⁃497⁃5p
低（0.42±0.08，t=6.768，P=0.003，图 2A）。在转染 表达。

miR⁃497⁃5p mimics后，ARPE⁃19 细胞中 miR⁃497⁃5p 2.3 miR⁃497⁃5p过表达逆转lncRNA VIM⁃AS1过表
表达显著升高（3.31±0.30，t=11.38，P < 0.001），而 达对HG处理的ARPE⁃19细胞迁移和凋亡的影响

miR⁃497⁃5p 在 miR⁃497⁃5p 敲低后显著下调（0.31± 首 先 ，观 察 到 miR ⁃ 497 ⁃ 5p 在 HG 处 理 后 的
0.11，t=5.911，P=0.004，图 2B），表明转染成功。预 ARPE⁃19 细胞中显著上调（2.36±0.31，t=6.820，P=
测lncRNA VIM⁃AS1和miR⁃497⁃5p之间存在结合位 0.002，图 3A）。为探究 lncRNA VIM⁃AS1/miR⁃497⁃5p
点（图2C）。为了进一步验证这种结合关系，进行了 在 DR 进展中的潜在作用，将 miR⁃497⁃5p mimics 和

双荧光素酶报告基因测定，结果显示 miR⁃497⁃5p OE⁃VIM⁃AS1 共转染 HG 处理的 ARPE⁃19 细胞。

A B C
1.5 ** ** 6 ** （ % ） 150 * *
VIM⁃AS1 相对表达水平 1.0 VIM⁃AS1 相对表达水平 4 2 细胞活力 100

50
0.5
0.0 0 0
HG+OE⁃VIM⁃AS1
HG+vector
NG AGE HG vector OE⁃VIM⁃AS1 NG HG

D NG HG HG+vector HG+OE⁃VIM⁃AS1 25 **
10 7 10 7 10 7 10 7 ***
2.67% 2.66% 12.59% 8.77% 12.75% 8.60% 2.40% 4.04% （ % ） 20
10 6 10 6 10 6 10 6 15
10 5 10 5 10 5 10 5 细胞凋亡 10
10 4 10 4 10 4 10 4 5
PI 3 3 3 3
10 10 10 10 0
0 91.62% 3.05% 0 68.93% 9.71% 0 68.51% 10.14% 0 89.91% 3.65% NG HG
5
6
4
3
2
4
3
6
5
2
4
3
6
5
2
2
3
4
6
5
10 10 10 10 10 10 7 10 10 10 10 10 10 7 10 10 10 10 10 10 7 10 10 10 10 10 10 7 HG+vector
Annexin V HG+OE⁃VIM⁃AS1
E NG HG HG+vector HG+OE⁃VIM⁃AS1
** **
80
（ % ） 60
h
细胞迁移 20
0 40
0
NG HG
h HG+vector
24 HG+OE⁃VIM⁃AS1
A：qRT⁃PCR评估HG、AGE处理后ARPE⁃19细胞中LncRNA VIM⁃AS1的表达；B：用载体（vector）或OE⁃VIM⁃AS转染HG处理的ARPE⁃19细
胞后，qRT⁃PCR测定OE⁃VIM⁃AS1转染后ARPE⁃19细胞中LncRNA VIM⁃AS1的表达；C：CCK⁃8测定法检测细胞活力；D：使用流式细胞术评估细
胞凋亡情况；E：伤口愈合实验用于检测细胞迁移情况。两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
*
**
***
图1 HG处理抑制ARPE⁃19细胞的增殖和迁移，同时通过下调 lncRNA VIM⁃AS1促进细胞凋亡
Figure 1 HG treatment inhibited the proliferation and migration of ARPE⁃19 cells，while promoting apoptosis by down⁃reg⁃
ulating lncRNA VIM⁃AS1