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第43卷第2期 李晨星，周晓燕，张慕玲. QPRT 基因功能缺失对肾脏发育的影响［J］.
2023年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（2）：207-212 ·209 ·

析已获得的QPRT敲除小鼠的表型，以出生后第8周 A
-/- +/+
QPRT （KO 组）小鼠为实验组，同周龄 QPRT （WT
组）小鼠作为对照组，处死小鼠后取出肾脏组织。称 60 70 80 90 100
重法检测各组小鼠的体重与肾脏重量，评估肾脏系数
（肾重/体重比）结果是否具有统计学差异。使用全自
动生化分析仪测量小鼠血清肌酐、尿素氮、尿总蛋白， 60 70 80 90 100
计算内生肌酐清除率。分离E11.5 WT型胎鼠和KO
型胎鼠的肾脏、脾脏、肺部、心脏及肝脏，4％多聚甲醛
60 70 80 90 100
固定后进行常规石蜡包埋、切片，通过苏木精⁃伊红
（hematoxylin⁃eosin，HE）染色评估组织病理学变化。

1.3 统计学方法 60 70 80 90 100
计量资料采用均数±标准差（x ± s）表示，两组间 B
P M W B P M W B
比较采用 t 检验。所有分析均采用 SPSS 22.0 软件，
双侧检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 QPRT在胎鼠肾脏组织的表达
显微镜拍照如下图。发现QPRT 在E13天胎鼠 KO WT
肾脏组织的输尿管芽（ureteric bud，UB）表达（图1）。 M
（bp）
—8 000
×200 ×100 —5 000
—3 000
—2 000

—1 000
—750
—500
—250
—100
E1 3 d胎鼠肾脏组织UB（红色箭头）。
A：F0小鼠基因测序结果；B：PCR 鉴定KO 型和WT 型小鼠。P：
图1 QPRT在胎鼠肾脏的输尿管芽中表达 阳性对照；M：DNA Ladder；W：野生型对照；B：空白对照（ddH2O）。
Figure 1 Expression of QPRT in ureteril bud of fetal 图2 小鼠PCR基因型鉴定
mouse kidney Figure 2 PCR genotyping of the QPRT WT and KO mice

2.2 QPRT基因敲除小鼠基因型鉴定 野生型 杂合子 纯合子
对 F2 代小鼠提取鼠尾 DNA 进行 PCR 扩增，电
泳结果如图 2 示，出现 1 条 256 bp 左右条带的为 QPRT — 31 kDa
QPRT （KO组）小鼠；只出现1条408 bp左右的条带
-/-
的为QPRT （WT组）小鼠。 GAPDH —36 kDa
+/+
2.3 基因敲除小鼠肾脏组织中QPRT蛋白表达情况
Western blot结果表明，QPRT 小鼠肾脏组织中 图3 Western blot法检测QPRT蛋白在野生型、杂合子、纯
-/-
合子小鼠肾脏组织中的表达
QPRT 蛋白基本不表达，而 QPRT 小鼠肾脏组织中
+/+
Figure 3 Detection of QPRT protein expression in the
的 QPRT 表达水平较高，杂合子的表达水平介于两 wild type，heterozygote and homozygote mouse
者之间（图3），GAPDH为内参蛋白。 kidney tissues by Western blot
2.4 QPRT基因敲除小鼠表型鉴定
+/+
-/-
+/+
2.4.1 QPRT 与QPRT 小鼠的体重、肾脏重量及肾 QPRT 小鼠作为对照组。
脏系数分析 雌性组（KO组n=8，WT组n=8）：在小鼠体重上，
以出生后第 8 周 QPRT 小鼠为实验组，同周龄 KO 组平均值 19.32 g 小于 WT 组平均值 19.95 g（P＜
-/-