Page 89 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第2期 张哲明，吴 艳，邸婷婷，等. microRNA let⁃7在COPD 稳定期男性患者血清中的表达及临床意义［J］.
2023年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（2）：230-235 ·231 ·

efficiency of combined indexes was better，and its sensitivity and specificity were 83.51% and 70.51%，respectively. Conclusion：The
decrease of the serum let⁃7 expression level was related to the incidence of COPD. Let⁃7 has diagnostic value in patients with mild
COPD，which could provide reference for timely clinical diagnosis and standardized treatment.
［Key words］ Chronic obstructive pulmonary disease；Let⁃7；Lung ventilation function
［J Nanjing Med Univ，2023，43（02）：230⁃235］

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmo⁃ 障碍。排除标准：①合并其他呼吸系统疾病、气胸、
nary disease，COPD）是以持续的气流受限为特征，气 肋骨骨折、严重的心脑血管疾病危及生命、感染、自
道、肺实质和肺血管等的慢性炎症为主要发病过程 身免疫性疾病、肝肾功能不全、恶性肿瘤；②近 3 个
的呼吸系统疾病 ［1-2］ 。目前我国有近 1 亿 COPD 患 月有 COPD 急性发作史；③临床资料不完整。根据
者，COPD 的发病率和病死率高，早期症状少，病程 GOLD将COPD依次分为GOLDⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级。
迁延，从慢性炎症、损伤、修复和呼吸道结构重塑， 此外，另选取本院同期进行体检的健康志愿者
到可检测到的肺功能异常之间往往要经历一段很 100 例，其性别和年龄与 COPD 组患者相匹配，肺功
［3］
长的时间，导致 COPD 漏诊漏治 。研究表明在肺 能均正常，无高血压、糖尿病、自身免疫性疾病等。
功能变化可检测之前及时对 COPD 进行诊断并干 根据有无吸烟史，将健康体检者分为不吸烟对照组
预，将显著减缓疾病进展、提高生活质量并降低医 50例，吸烟对照组50例。本研究经过南京医科大学
疗费用 ［4-5］ 。 附属无锡人民医院伦理委员会审核批准，所有受试
微小 RNA（microRNA）是一组广泛存在于人体 者均签署知情同意书。
中的内源性单链非编码RNA分子，广泛参与机体发 1.2 方法
育、细胞分化、细胞增殖和凋亡等生物学过程 ［6-7］ 。 1.2.1 试剂与仪器
本课题组前期研究发现COPD患者血清和肺组 提取总RNA的试剂RNAiso Blood（9112/9113）、
织中 microRNA let⁃7 表达量异常，但 let⁃7 在正常人 逆 转 录 试 剂 盒 PrimeScript TM RT reagent kit with
群、吸烟人群及不同慢性阻塞性肺疾病全球倡议 gDNA eraser（RR047A）、荧光定量试剂盒TB Green TM⁃
（global initiative for chronic obstructive lung disease， Premix Ex Taq Ⅱ（RR820A）（TaKaRa 公司，日本），
TM
GOLD）分级的COPD患者血清中是否存在表达异常 待检测内参引物U6及microRNA let⁃7a、let⁃7c、let⁃7d
目前尚不清楚。本研究拟通过对正常不吸烟对照 的引物由上海 Sangon Biotech 公司合成。引物序列
组、吸烟对照组及不同 GOLD 分级的 COPD 患者血 见表1。实时定量荧光PCR仪（ABI公司，美国）。
清 let⁃7 水平进行检测，探索血清 let⁃7 对 COPD 早期 1.2.2 血浆采集及血清提取
诊断的可能性及其对 COPD 严重程度评估的价值， 空腹采集 5 mL 肘静脉血于含枸橼酸钠抗凝剂
为COPD的临床诊疗提供更广阔的视角。 的真空离心管中，室温静置0.5 h，4 ℃ 3 000 r/min离
心10 min收集血清，分装于无RNA酶的EP管中，冻
1 对象和方法
存于-80 ℃冰箱备用。血清提取后于 3 d 内完成检
1.1 对象 测。
从无锡市人民医院呼吸与危重症学科慢病临 1.2.3 血清RNA提取和let⁃7表达检测
床数据库中选取 2019 年 10 月—2022 年 6 月于本科 取 200 μL 血清，按照血清 RNA 提取试剂盒
就诊的 COPD 稳定期男性患者 160 例。纳入标准： RNAiso Blood 操 作 流 程 提 取 包 含 miRNA 的 总

①符合《慢性阻塞性肺疾病诊治指南（GOLD2019 RNA。 逆 转 录 试 剂 盒 PrimeScript TM RT reagent kit
年）》的诊断标准：有呼吸困难、慢性咳嗽咳痰；危险 with gDNA eraser 逆转录成cDNA，RT⁃PCR分析采用
因素暴露史，如香烟烟雾等；且吸入支气管舒张剂 TB Green Premix Ex Taq Ⅱ和 ABI 9600 实时 PCR
TM
TM
后患者第 1 秒用力呼气容积（forced expiratory vol⁃ 检测系统（Applied Biosystems）进行。反应条件：
ume in one second，FEV1 ）/用力肺活量（forced vital 95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s，40 个循环。U6 用作
capacity，FVC）<70％，确定存在持续气流受限，并排 microRNA 的内参。使用式 2 -（△△CT） 计算每个基因表
除其他肺部疾病的影响；②精神状态正常，无沟通 达的变化。