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第43卷第3期           何树燕,沈      冬,林青凤,等. CCT2对肺腺癌细胞增殖、迁移的影响及其临床意义[J].
                  2023年3月                     南京医科大学学报(自然科学版),2023,43(3):319-325                        ·323 ·


                                            表2 肺腺癌患者临床病理特征与CCT2表达的关系
                  Table 2 Relationship between clinical pathological features and CCT2 expression in patients with lung adenocarcinoma
                                                                                                          (例)
                                      性别         组织分化程度          T分期      N分期        TNM分期             Ki⁃67
                       分组
                                    男性   女性    高、中分化     低分化    T1-2  T3-4  N0  N1-2  Ⅰ~Ⅱ期  Ⅲ~Ⅳ期  低表达     高表达
                 CCT2低表达组(n=42)      18   24      13       29    30  12  19  23     20      22      34      08
                 CCT2高表达组(n=30)      17   13      08       22    24  06  10  20     09      21      17      13
                 χ 值                  1.336          0.156        0.686   1.710        2.258           4.996
                  2
                 P值                   0.339          0.795        0.582   0.226        0.152           0.036


                H1650、H1299 细胞中的表达水平高于人肺上皮                        的表达(图3A~C),在蛋白水平检测敲低效率,结果
                BEAS⁃2B 细胞的表达水平(图 2B)。qRT⁃PCR 检测                  显示si⁃CCT2(679)均可抑制A549、H1650、H1299细
                发现,A549、H1650、H1299细胞中的CCT2 mRNA的                 胞中CCT2的表达(图3D)。综合上述抑制效率,选择
                相对表达水平都高于BEAS⁃2B细胞(图2C)。                          si⁃CCT2(679)进行转染完成后续的生物学功能实验。

                2.4  RT⁃PCR、Western blot 验证 si⁃CCT2 对 A549、       2.5  敲低CCT2后可有效抑制A549、H1650的增殖
                H1650、H1299的敲低效率                                      采用CCK⁃8实验检测转染si⁃CCT2后细胞的增
                    将si⁃NC、si⁃CCT2转染A549、H1650、H1299后,            殖 能 力 ,敲 低 CCT2 48 h 后 可 明 显 抑 制 A549 和
                在 mRNA 水平检测敲低效率,结果显示 3 条候选                        H1650 细胞的增殖(P<0.001,图 4A、B),不能抑制

                si⁃CCT2均可抑制A549、H1650、H1299细胞中CCT2                H1299细胞的增殖(图4C)。

                A                      B                      C                      D
                              ***                    ***                     ***             A549 H1650 H1299
                            ***                    ***                     ***
                          ***               1.0   ***              1.0   ***                    ( 679 )  ( 679 )  ( 679 )
                    1.0
                                            0.8
                                                                   0.8
                    0.8
                 A549中  CCT2 mRNA相对表达量  0.6  H1650中  CCT2 mRNA相对表达量  0.6  H1299中  CCT2 mRNA相对表达量  0.6  GAPDH  si⁃NC  si⁃CCT2  si⁃NC  si⁃CCT2  si⁃NC  si⁃CCT2  57 kDa
                                                                                        CCT2
                    0.4
                                                                   0.4
                                            0.4
                                            0.2
                    0.2
                                                                   0.2
                                                                                                            36 kDa
                     0
                                                 si⁃CCT2 ( 812 )
                                                   si⁃CCT2 ( 1144 )
                            si⁃CCT2 ( 1144 )
                         si⁃CCT2 ( 812 )
                      si⁃CCT2 ( 679 )        0 si⁃CCT2 ( 679 )      0 si⁃CCT2 ( 679 )
                                                                           si⁃CCT2 ( 1144 )
                                                                        si⁃CCT2 ( 812 )
                       si⁃NC
                                              si⁃NC
                                                                      si⁃NC
                   A~C:RT⁃PCR 验证 si⁃CCT2(679、812、1144)对 A549(A)、H1650(B)、H1299(C)的敲低效率;D:Western blot 验证 si⁃CCT2(679)对 A549、
                H1650、H1299的敲低效率。两组比较, P<0.001。
                                          ***
                                             图3 RT⁃PCR、Western blot验证CCT2转染效率
                                  Figure 3 CCT2 transfection efficiency verified by RT⁃PCR and Western blot
                          A                         B                         C
                             2.0                        2.0                       2.0
                                   si⁃NC                     si⁃NC                     si⁃NC
                                               ***                       ***
                             1.6   si⁃CCT2              1.5  si⁃CCT2              1.5  si⁃CCT2
                            ( 490 nm )  1.2            nm )  1.0                 ( 490 nm )  1.0
                            D  0.8                     ( 490  D  0.5             D  0.5
                             0.4
                              0                          0                         0
                               0 h     24 h    48 h       0 h    24 h    48 h       0 h     24 h   48 h
                                       A549                     H1650                      H1299
                   A:CCK⁃8实验检测A549细胞的增殖能力;B:CCK⁃8实验检测H1650细胞的增殖能力;C:CCK⁃8实验检测H1299细胞的增殖能力。两组
                比较, P<0.001。
                    ***
                                         图4   敲低CCT2后对A549、H1650、H1299细胞增殖的影响
                             Figure 4  Effect of knocking down CCT2 on proliferation of A549,H1650 and H1299 cells
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