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第43卷第3期 何树燕,沈 冬,林青凤,等. CCT2对肺腺癌细胞增殖、迁移的影响及其临床意义[J].
2023年3月 南京医科大学学报(自然科学版),2023,43(3):319-325 ·323 ·
表2 肺腺癌患者临床病理特征与CCT2表达的关系
Table 2 Relationship between clinical pathological features and CCT2 expression in patients with lung adenocarcinoma
(例)
性别 组织分化程度 T分期 N分期 TNM分期 Ki⁃67
分组
男性 女性 高、中分化 低分化 T1-2 T3-4 N0 N1-2 Ⅰ~Ⅱ期 Ⅲ~Ⅳ期 低表达 高表达
CCT2低表达组(n=42) 18 24 13 29 30 12 19 23 20 22 34 08
CCT2高表达组(n=30) 17 13 08 22 24 06 10 20 09 21 17 13
χ 值 1.336 0.156 0.686 1.710 2.258 4.996
2
P值 0.339 0.795 0.582 0.226 0.152 0.036
H1650、H1299 细胞中的表达水平高于人肺上皮 的表达(图3A~C),在蛋白水平检测敲低效率,结果
BEAS⁃2B 细胞的表达水平(图 2B)。qRT⁃PCR 检测 显示si⁃CCT2(679)均可抑制A549、H1650、H1299细
发现,A549、H1650、H1299细胞中的CCT2 mRNA的 胞中CCT2的表达(图3D)。综合上述抑制效率,选择
相对表达水平都高于BEAS⁃2B细胞(图2C)。 si⁃CCT2(679)进行转染完成后续的生物学功能实验。
2.4 RT⁃PCR、Western blot 验证 si⁃CCT2 对 A549、 2.5 敲低CCT2后可有效抑制A549、H1650的增殖
H1650、H1299的敲低效率 采用CCK⁃8实验检测转染si⁃CCT2后细胞的增
将si⁃NC、si⁃CCT2转染A549、H1650、H1299后, 殖 能 力 ,敲 低 CCT2 48 h 后 可 明 显 抑 制 A549 和
在 mRNA 水平检测敲低效率,结果显示 3 条候选 H1650 细胞的增殖(P<0.001,图 4A、B),不能抑制
si⁃CCT2均可抑制A549、H1650、H1299细胞中CCT2 H1299细胞的增殖(图4C)。
A B C D
*** *** *** A549 H1650 H1299
*** *** ***
*** 1.0 *** 1.0 *** ( 679 ) ( 679 ) ( 679 )
1.0
0.8
0.8
0.8
A549中 CCT2 mRNA相对表达量 0.6 H1650中 CCT2 mRNA相对表达量 0.6 H1299中 CCT2 mRNA相对表达量 0.6 GAPDH si⁃NC si⁃CCT2 si⁃NC si⁃CCT2 si⁃NC si⁃CCT2 57 kDa
CCT2
0.4
0.4
0.4
0.2
0.2
0.2
36 kDa
0
si⁃CCT2 ( 812 )
si⁃CCT2 ( 1144 )
si⁃CCT2 ( 1144 )
si⁃CCT2 ( 812 )
si⁃CCT2 ( 679 ) 0 si⁃CCT2 ( 679 ) 0 si⁃CCT2 ( 679 )
si⁃CCT2 ( 1144 )
si⁃CCT2 ( 812 )
si⁃NC
si⁃NC
si⁃NC
A~C:RT⁃PCR 验证 si⁃CCT2(679、812、1144)对 A549(A)、H1650(B)、H1299(C)的敲低效率;D:Western blot 验证 si⁃CCT2(679)对 A549、
H1650、H1299的敲低效率。两组比较, P<0.001。
***
图3 RT⁃PCR、Western blot验证CCT2转染效率
Figure 3 CCT2 transfection efficiency verified by RT⁃PCR and Western blot
A B C
2.0 2.0 2.0
si⁃NC si⁃NC si⁃NC
*** ***
1.6 si⁃CCT2 1.5 si⁃CCT2 1.5 si⁃CCT2
( 490 nm ) 1.2 nm ) 1.0 ( 490 nm ) 1.0
D 0.8 ( 490 D 0.5 D 0.5
0.4
0 0 0
0 h 24 h 48 h 0 h 24 h 48 h 0 h 24 h 48 h
A549 H1650 H1299
A:CCK⁃8实验检测A549细胞的增殖能力;B:CCK⁃8实验检测H1650细胞的增殖能力;C:CCK⁃8实验检测H1299细胞的增殖能力。两组
比较, P<0.001。
***
图4 敲低CCT2后对A549、H1650、H1299细胞增殖的影响
Figure 4 Effect of knocking down CCT2 on proliferation of A549,H1650 and H1299 cells