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第43卷第3期              丁浩南，严 佳，唐诗佳，等. 佛手柑内酯对人牙髓干细胞成骨分化的影响［J］.
                  2023年3月                     南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（3）：334-342                        ·335 ·


                groups and the 15.0 μmol/L BP treatment was the best（P < 0.01）. Conclusion：BP shows good biosafety and can promote the
                osteogenesis differentiation of hDPSCs with better effect at the 15.0 μmol/L concentration in vitro.
               ［Key words］ bergapten；human dental pulp stem cells；osteogenic differentiation；bone tissue engineering
                                                                              ［J Nanjing Med Univ，2023，43（03）：334⁃342］






                    目前，由于外伤、肿瘤、炎症等多种因素导致的                         结构  ［13］ ；另一项研究表明，BP 在体外和体内均可促
                                                           ［1］
                临界大小骨缺损成为口腔修复的重大问题之一 。                            进小鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞，并且通过触
                传统用于骨增量的手段，例如自体骨移植等，虽在                            发 WNT/β⁃catenin 信号通路增加成熟成骨细胞的
                临床上取得了一定的治疗效果，但仍存在着诸如取                            ALP ［14］ 、Runt 相关转录因子 2（Runt⁃related transcrip⁃
                骨量有限、塑形困难等问题，从而导致供区产生较                            tion factor 2，RUNX2）、OCN 和 COL1 的表达    ［15］ 。这
                大损伤 。                                             些研究均表明 BP 可以通过调节骨稳态的方式促进
                      ［2］
                    骨组织工程可将负载有种子细胞及具有成骨                           骨组织再生。然而目前尚无BP对于人源干细胞生长
                诱导效应生物因子的生物支架植入骨缺损区，诱导                            分化影响的研究，这阻碍了其在组织工程中的应用。
                新骨生成。与传统修复方法相比，骨组织工程有生                                本研究将从细胞层面入手，研究 BP 对 hDPSC
                物安全性好、损伤小、成骨诱导活性高等优点 。种                           的体外增殖及成骨分化能力的影响，并探究其最佳
                                                        ［3］
                子细胞与促成骨效应生物因子是骨组织工程的关                             体外作用浓度，为BP在骨组织工程中的应用提供研
                键。既往研究表明，多来源的干细胞是骨组织工程                            究基础。
                              ［4］
                的理想细胞来源 。具有成骨诱导效应的生物因子
                                                                  1  材料和方法
                是近年来骨组织工程的研究重点，在众多具有诱导分
                化的物质中，天然小分子化合物颇受重视，其具有来                           1.1  材料
                源广、易获取且生物安全性佳等优势 。                                    BP（M101152，上海 Aladdin 公司）；二甲基亚砜
                                               ［5］
                    人 牙 髓 干 细 胞（human dental pulp stem cell，      溶 液（dimethyl sulfoxide，DMSO）（北 京 Solarbio 公
                hDPSC）可以从拔除的正畸牙、脱落乳牙以及第三磨                         司）；α⁃MEM 培养基（32561037，Gibco 公司，美国）；
                牙中提取    ［6-7］ 。hDPSC具有多系分化能力，诸多研究                 胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）（Invigentech 公
                表明其在组织工程应用中有着巨大潜力。hDPSC                           司，美国）；人相关干细胞成骨诱导分化培养基
                能够分化为成骨细胞样细胞并表达碱性磷酸酶                             （HUXXC90021，广州 Cyagen 公司）；0.25%含 EDTA
               （alkaline phosphatase，ALP）、Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ，        胰蛋白酶（25200072，Gibco 公司，美国）。 CCK⁃8试
                COL1）、骨桥蛋白（osteopontin，OPN）和骨钙素（os⁃               剂盒（EICK⁃000208，南京 Enogenen Biotech 公司）；
                teocalcin，OCN）等标志物，并且其增殖率高、免疫原                    BCIP/NBT ALP 显色试剂盒（c3206，上海Beyotime 公
                性低、冷冻保存损伤小，因此 hDPSC 被作为组织工                        司）；BCA 蛋白质定量试剂盒（PT0001，北京 Leagene
                程理想的种子细胞之一 。                                      公司）；ALP试剂盒（A059⁃2⁃2，南京建成公司）；茜素
                                    ［8］
                    佛手柑内酯（bergapten，BP），化学式（C12H8O4 ），            红（alizarin red S，ARS）溶液（DS0072，北京 Leagene
                又名补骨脂素，是一种广泛存在于水果（如柠檬、葡                           公司）；人相关干细胞表面标志检测试剂盒（HUX⁃
                萄）及药用植物（如佛手柑）中的天然呋喃香豆素类化                          MX⁃09011，广州 OriCell 公司）。RNA sample Total
                合物 。既往研究表明BP有抗炎、抗菌及预防骨质疏                          RNA kit（DP430，北 京 TIANGEN 公 司 ）；Prime
                   ［9］
                松等多重作用，并且其在7.5~30.0 μmol/L 浓度范围                   Script RT Master Mix（RR036A）、TB Green premix
                                                                                                         TM
                                                                       TM
                内可以促进大鼠骨髓干细胞的成骨分化                  ［10-11］ 。研究    EX Taq Ⅱ（RR820A）（Takara 公司，日本）。OCN抗
                                                                        TM
                表明，BP 可以有效抑制脂多糖诱导的破骨细胞产                           体、RUNX2抗体、OPN抗体、ALP抗体（Abcam公司，
                生，从而预防并治疗炎症性骨质吸收                 ［12］ 。糖尿病相       英国）。荧光定量PCR仪（Quant studio 7，ABI公司，

                关的骨质疏松症研究发现，BP 会显著抑制 RANKL                        美国）；BDFACSCalibur 流式细胞仪（BD Bioscience
                信号转导，抑制 PI3K/AKT、JNK/MAPK 和 NF⁃κB 信               公司，美国）；超微量核酸蛋白检测仪（NanoVue，GE
                号通路的激活，从而降低破骨细胞分化并保护小梁                            healthcare公司，美国）；LIVE/DEAD细胞成像试剂盒
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