Page 49 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第3期 丁浩南，严 佳，唐诗佳，等. 佛手柑内酯对人牙髓干细胞成骨分化的影响［J］.
2023年3月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（3）：334-342 ·339 ·

的影响。成骨诱导 7 d 后的结果显示，在不同浓度 表达高于7.5 μmol/L BP组（P < 0.01），且15.0 μmol/L
BP作用下，BP组ALP、RUNX2的表达均高于对照组 BP组OPN、RUNX2表达高于其余两组（P < 0.01）。
（图6，P < 0.01），15.0 μmol/L BP组及30.0 μmol/L BP 2.7 BP对hDPSC成骨相关蛋白表达的影响
组的OPN及OCN表达高于对照组，差异均有统计学意 免疫印迹法分析各组成骨分化相关蛋白的表
义（P < 0.01）。在BP组中，15.0 μmol/L BP组ALP、OCN 达水平（图7 A）。以β⁃ACTIN作为内参，以其灰度值

A B
对照组 7.5 μmol/L BP组
0.8
*△# *
*
nm ） 0.6
（ 562 D 0.4

15.0 μmol/L BP组 30.0 μmol/L BP组 0.2
0
7.5 μmol/L BP组 30.0 μmol/L BP组
对照组
15.0 μmol/L BP组

A：成骨诱导 21 d 后各组 hDPSC ARS 染色图（×100）；B：成骨诱导 21 d 后各组钙结节半定量分析。与对照组相比，P < 0.01（n=3）；与
*
7.5 μmol/L BP组相比，P < 0.01（n=3）；与30.0 μmol/L组相比，P < 0.01（n=3）。
#
△
图5 BP对hDPSC细胞外基质矿化的影响
Figure 5 Influence of BP on the extracellular matrix mineralization of hDPSC

与各组进行比对，BP组的OCN、ALP、OPN、RUNX2表 化，以调节骨稳态的方式促进骨折愈合，减缓骨质
达均高于对照组（图7 B，P < 0.01），且15.0 μmol/L组 疏松以及炎症导致的骨丧失 。
［17］
ALP、OCN、RUNX2表达均高于其余两组（P < 0.01）。 hDPSC 与胚胎干细胞及诱导多能干细胞相比，
有着取材方便、伦理问题少、冷冻损伤低等优点，并
3 讨 论
且拥有较高的分化潜能以及低免疫原性，被视为理
BP是一种呋喃香豆素类天然小分子化合物，有 想的种子细胞 ［18-19］ 。本研究通过设置不同浓度的
着类雌激素的生物效应。既往研究表明BP有抗炎、 BP 研究其对 hDPSC 成骨分化的影响，以期评估 BP
抑菌、调节免疫、防治骨质疏松等作用 ［16］ 。研究显 促 hDPSC 成骨分化能力并探究其促成骨细胞分化
示BP通过抑制破骨细胞生成，促进成骨细胞增殖分 的最佳浓度。
对照组 本研究采用胶原酶消化法从人第三磨牙中提
3.0 7.5 μmol/L BP组 # 取 hDPSC，流式鉴定结果显示表面标志 CD45 和
15.0 μmol/L BP组 △ △ CD34 均为阴性，间充质干细胞表面标志 CD29、
*
#
mRNA相对表达水平 2.5 * △ * * △ △ * * * CD105、CD73 和 CD166 为阳性，符合国际细胞治疗
30.0 μmol/L BP组
△
2.0
*
*
协会（ISCT）的间充质干细胞鉴定标准，证明此法所
*
1.5
提取的细胞具有干细胞特征
［20］
。干细胞的增殖与
1.0
0.5 成骨分化是骨再生修复的重要环节。首先通过对
0~240.0 μmol/L BP的生物毒性进行检测，发现当BP
浓度超过 60.0 μmol/L 后，BP 表现出对 hDPSC 增殖
0
ALP OCN OPN RUNX2
的抑制作用，因此在后续实验中使用 7.5、15.0、
*
△
与对照组相比，P < 0.01（n=3）；与 7.5 μmol/L BP 组相比，P <
30.0 μmol/L 浓度的 BP。生物安全性实验发现 7.5、
0.01（n=3）；与30.0 μmol/L BP组相比，P < 0.01（n=3）。
#
图6 BP对hDPSC成骨相关基因表达的影响 15.0、30.0 μmol/L BP对hDPSC的增殖无明显抑制作
Figure 6 Effects of BP on the expression of osteogenic re⁃ 用，这些结果证实了对于hDPSC，7.5、15.0、30.0 μmol/L
lated genes in hDPSC BP具有良好的安全性。