Page 24 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 24

第43卷第4期
               ·462 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年4月


             (6.16 ± 1.31)%,差异有统计学意义(P < 0.001);                (4.08±1.26)%,低于 HC 组(7.54±1.67)%,差异有统
              RA 组外周血表达 CXCR4 Treg 占 Treg 细胞比例为                 计学意义(P < 0.001,图1)。
                                     +

              A                                                                        B
                   15×10 4                  10 4  5.68%         15×10 4                  Treg        ***

                   10×10 4                  10 3                10×10 4                    10 8           ▲
               HC组  SSC⁃A                 Comp⁃APC⁃A∷CD25       SSC⁃A                    CD127 -  ( % )  T 6  ▲▲ ▲ ▲
                                                                                                          ▲
                                                                                                          ▲ ▲
                                                                                                          ▲ ▲
                                                                                                          ▲
                                                                                                          ▲ ▲
                    5×10 4      36.80%      10 0 2               5×10 4       7.39%      CD25 +  /CD4 +  4  ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲▲▲
                                                                                                         ▲ ▲ ▲
                                                                                                        ▲
                                                                                                         ▲
                                                                                                          ▲ ▲ ▲
                                                                                                           ▲ ▲
                                                                                                         ▲
                                                                                                          ▲ ▲
                                                                                                           ▲
                                                                                                        ▲ ▲
                                                                                                         ▲ ▲ ▲
                                                                                                          ▲ ▲
                                                                                                          ▲
                       0                   -10 2                    0                    CD4 +  2 0      ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲
                                                                                                          ▲
                                                                        3
                          3
                        -10 0 10 3  10 4  10 5  0     10 3  10 4     -10 0  10 3  10 4          HC组      RA组
                         Comp⁃PerCP⁃A∷CD4      Comp⁃PE⁃A∷CD127        Comp⁃FITC⁃A∷CXCR4
                   12×10 4                 10 4  3.35%          12×10 4                   ( % )  20  ***
                    9×10 4                                       9×10 4                    15
               RA组  SSC⁃A  6×10 4  61.32%  Comp⁃APC⁃A∷CD25  10 3  SSC⁃A  6×10 4           Treg/Treg  10
                                                                                                          ▲
                                                                                                          ▲
                    3×10 4                  0                    3×10 4    3.28%            5           ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲
                                                                                                          ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲
                                                                                                         ▲ ▲ ▲
                                                                                                        ▲ ▲ ▲
                                                                                                            ▲
                                                                                                         ▲ ▲ ▲ ▲ ▲
                                                                                                            ▲
                                                                                                         ▲ ▲ ▲ ▲
                                                                                                           ▲
                       0                                            0                     CXCR4 +  0    ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲
                                                                                                           ▲
                          3
                                                                       3
                        -10 0 10 3  10 4  10 5  0  10 3  10 4        -10 0 10 3  10 4  10 5     HC组      RA组
                         Comp⁃PerCP⁃A∷CD4      Comp⁃PE⁃A∷CD127        Comp⁃FITC∷CXCR4
                 A:HC组和RA组外周血CXCR4 Treg比例的代表性流式结果;B:HC组(n=40)和RA组(n=51)外周血Treg和CXCR4 Treg的比例。两组比
                                                                                               +
                                       +
              较, P < 0.001。
                ***
                                                                           +
                                       图1 RA患者与HC组外周血Treg及CXCR4 Treg的比例
                        Figure 1 The ratio of Treg and CXCR4 Treg in peripheral blood between RA and healthy control
                                                       +
              2.3 不同疾病活动度RA患者外周血Treg及CXCR4                  +        相关性分析结果显示RA患者外周血Treg比例
              Treg比例                                            以及 CXCR4 Treg 比例与 DAS28 评分、CRP、ESR 及
                                                                           +
                  将 RA 患者根据 DAS28 评分分为缓解、低疾病                    IL⁃6水平呈负相关,与病程无明显相关性(图3、4)。
                                                                                                +
                                                                                                       -
                                                                                           +
              活动度、中疾病活动度和高疾病活动度4组,比较不                           2.4  RA 患者关节滑液 CD4 CD25 CD127 Treg 及
              同疾病活动度患者外周血中Treg比例有无差异,结                          CXCR4 Treg比例
                                                                       +
              果显示RA高疾病活动度组外周血Treg比例低于缓                               RA 患者关节液中 CD4 CD25 CD127 Treg 占
                                                                                          +
                                                                                                +
                                                                                                       -
              解组[(3.01±1.72)% vs.(5.25±2.28)%,P < 0.05)],       CD4 T 细胞比例高于 OA 患者[(11.09±1.54)% vs.
                                                                    +
              其他组别之间比较无明显差异(图 2A)。随后比较                          (6.22±1.11)%,P < 0.001,图 5],RA 患者关节液中
              4 组患者外周血中 CXCR4 Treg 比例有无差异,结                     CD4 CD25 CD127 Treg占CD4 T细胞比例高于OA患
                                                                                -
                                                                    +
                                                                                           +
                                                                         +
                                      +
              果显示高疾病活动度组外周血CXCR4 Treg比例显                        者[(11.09±1.54)% vs.(3.31±1.20)%,P < 0.001,图6]。
                                                 +
              著低于缓解组[(3.15±0.96)% vs.(5.45±0.77)%,                   RA 患者关节液中 CXCR4 Treg 比例(12.93±
                                                                                             +
              P < 0.001]和低疾病活动度组[(3.15±0.96)% vs.               2.65)%较 RA 患者外周血(4.29±1.07)%及 OA 患者
             (5.39±1.21)%,P < 0.001]。此外,中疾病活动度组                 关节液(6.18±0.98)%均显著增高,差异有统计学意
                     +
              CXCR4 Treg 比例低于缓解组[(4.17±0.91)% vs.               义(P < 0.001,图5、6)。
             (5.45±0.77)%,P < 0.05),其他组别之间比较无明显                 2.5  RA患者外周血Treg的迁移能力
              差异(图2D)。                                               磁珠正选外周血 CD4 T 淋巴细胞后即刻进行
                                                                                        +
                  将 RA 患者分成 RF 阳性、RF 阴性、抗 CCP 抗体                流式细胞术检测其纯度,结果显示,纯度达 99.55%
              阴性、5≤抗 CCP 抗体 < 200、抗 CCP 抗体≥200 组进               (图 7A)。Transwell 小室实验结果显示,RA 患者
              行外周血检测,结果显示各组间 RA 患者外周血                           外周血 Treg 细胞迁移率显著高于 HC 组外周血
              Treg以及CXCR4 Treg比例均无明显差异(图2B、C、                   Treg细胞迁移率[(31.26±8.30)% vs.(16.84±5.25)%,
                             +
              E、F)。                                             P < 0.001,图7B、C]。
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