Page 54 - 南京医科大学学报自然科学版

南京医科大学学报（自然科学版） 第43卷第4期
·492 · Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） 2023年4月

·基础研究·

lnc⁃NEAT1通过miR⁃29c⁃3p/CSPG4信号轴调节黑色素瘤B16细

胞的增殖、迁移和侵袭

谢 奇，樊鑫梅，韩永红，陶 娟，刘 旭，刘家秀 *

江苏护理职业学院药学与中药学院，江苏 淮安 223005

［摘 要］ 目的：探讨长链非编码RNA⁃核富集转录本1（long non⁃coding RNA⁃nuclear enriched abundant transcript 1，lnc⁃NEAT1）
对黑色素瘤（melanoma，MM）细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法：体外培养 MM 细胞系（A375、A875、M14、B16）和人表
皮黑色素细胞（HEMa⁃LP），采用实时荧光定量 PCR（real⁃time quantitative PCR，RT⁃qPCR）检测细胞中 lnc⁃NEAT1、microRNA⁃
29c⁃3p（miR⁃29c⁃3p）、硫酸软骨素蛋白多糖 4（chondroitin sulfate proteoglycan 4，CSPG4）mRNA 表达。取对数生长期 B16 细胞，
分为对照组（control 组）、si⁃NC 组、si⁃NEAT1 组、si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC 组、si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor 组，用 Lipofectamine
3000 将相应质粒转染到细胞中。RT⁃qPCR 检测转染效率，MTT 法检测细胞增殖活力，Transwell 小室检测细胞迁移和侵袭能
力，蛋白质印迹法检测细胞 CSPG4 及增殖、迁移与侵袭相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因检测 miR⁃29c⁃3p 与 lnc⁃NEAT1、
CSPG4 的靶向关系。裸鼠移植瘤实验探究 lnc⁃NEAT1 敲低对 MM 细胞体内生长的影响。结果：MM 细胞系中 lnc⁃NEAT1 和
CSPG4 mRNA水平显著高于HEMa⁃LP细胞，miR⁃29c⁃3p水平显著低于HEMa⁃LP细胞（P均 < 0.05）。敲低lnc⁃NEAT1可显著升
高miR⁃29c⁃3p表达，降低CSPG4 mRNA 和蛋白水平，抑制细胞增殖、迁移和侵袭，并降低Ki⁃67、N⁃cadherin 与Vimentin 蛋白水
平，升高E⁃cadherin 蛋白水平（P均 < 0.05）；下调miR⁃29c⁃3p表达可显著升高CSPG4 mRNA 和蛋白水平，减弱lnc⁃NEAT1敲低
对MM细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用（P < 0.05）。双荧光素酶报告基因检测结果显示，转染miR⁃29c⁃3p mimic 后，细胞中
NEAT1⁃WT和CSPG4⁃WT的荧光素酶活性显著降低（P < 0.05）。裸鼠移植瘤实验结果显示，敲低lnc⁃NEAT1可显著抑制体内移
植瘤生长，而抑制miR⁃29c⁃3p可显著减弱lnc⁃NEAT1敲低对移植瘤生长的抑制作用（P均 < 0.05）。结论：lnc⁃NEAT1可能通过
调节miR⁃29c⁃3p/CSPG4轴促进MM细胞增殖、迁移和侵袭。
［关键词］ 黑色素瘤；长链非编码RNA核富集转录本1；microRNA⁃29c⁃3p；硫酸软骨素蛋白多糖4；增殖；迁移；侵袭
［中图分类号］ R329.2 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2023）04⁃492⁃10
doi：10.7655/NYDXBNS20230407

Lnc ⁃ NEAT1 regulates the proliferation，migration and invasion of melanoma B16 cells
through the miR⁃29c⁃3p/CSPG4 signaling axis

XIE Qi，FAN Xinmei，HANG Yonghong，TAO Juan，LIU Xu，LIU Jiaxiu *
College of Pharmacy and Traditional Chinese Medicine，Jiangsu College of Nursing，Huai’an 223005，China

［Abstract］ Objective：To investigate the regulatory mechanism of long non⁃coding RNA⁃nuclear enriched transcript 1（lnc⁃NEAT1）
on the proliferation，migration and invasion of melanoma（MM）cells. Methods：MM cell lines（A375，A875，M14，B16）and human
epidermal melanocytes（HEMa⁃LP）were cultured in vitro，real⁃time quantitative PCR（RT⁃qPCR）was performed to determine the
mRNA expression of lnc⁃NEAT1，microRNA⁃29c⁃3p（miR⁃29c⁃3p）and chondroitin sulfate proteoglycan 4（CSPG4）in cells. B16 cells
at logarithmic growth phase were taken and separated into control group，si⁃NC group，si⁃NEAT1 group，si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC group，
and si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor group. Lipofectamine 3000 was applied to transfect the corresponding plasmids into cells. RT⁃qPCR
was performed to determine the transfection efficiency. MTT method was used to determine cell proliferation. Transwell assay was
performed to determine cell migration and invasion abilities. Western blotting was performed to determine the expression of CSPG4 and
proteins related to the proliferation，migration and invasion. Dual⁃luciferase reporter gene assay was performed to determine miR⁃29c⁃3p

［基金项目］ 淮安市自然科学研究计划（联合专项）项目（HABL202112）
∗
通信作者（Corresponding author），E⁃mail：1220714088@qq.com