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第43卷第4期         谢 奇,樊鑫梅,韩永红,等. lnc⁃NEAT1通过miR⁃29c⁃3p/CSPG4信号轴调节黑色素瘤B16细
                  2023年4月           胞的增殖、迁移和侵袭[J]. 南京医科大学学报(自然科学版),2023,43(04):492⁃501                  ·497 ·


                                                  表5 各组细胞迁移、侵袭能力比较
                                Table 5 Comparison of migration and invasion abilities in cells of each group  (x ± s,n=6)
                                  组别                           迁移细胞数(个)                     侵袭细胞数(个)
                       control组                                131.28 ± 14.90               107.36 ± 13.58
                       si⁃NC组                                  134.04 ± 15.26               112.15 ± 14.30
                       si⁃NEAT1组                               058.62 ± 7.75 *#             045.84 ± 7.61 *#
                       si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组                  053.54 ± 8.16 *#             042.90 ± 8.02 *#
                       si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor组          116.32 ± 13.40 &∆            089.26 ± 10.15 &∆
                   与control组相比,P < 0.05;与si⁃NC组相比,P < 0.05;与si⁃NEAT1组相比,P < 0.05;与si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组相比,P < 0.05。
                               *
                                                                     &
                                                 #
                                                                                                   ∆
                herin蛋白水平显著升高(P < 0.05);与si⁃NEAT1组、               3p inhibitor组Ki⁃67、N⁃cadherin与Vimentin蛋白水平
                si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组相比,si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃        显著升高,E⁃cadherin蛋白水平显著降低(P < 0.05,图3)。


                              A     B    C    D    E
                        Ki⁃67                          358 kDa          0.8
                                                                                          &Δ
                                                                       Ki⁃67/GAPDH  0.4  *#  *#
                     E⁃cadherin                        97 kDa           0.6
                     N⁃cadherin                        100 kDa          0.2

                      Vimentin                         54 kDa
                                                                         0
                                                                            A   B   C  D   E
                       GAPDH                           36 kDa

                        0.8
                                   *#  *#
                      E⁃cadherin/GAPDH  0.4  &Δ       N⁃cadherin/GAPDH 0.6  *#  &Δ   Vimentin/GAPDH 0.8  *#  &Δ
                        0.6

                                                                                      0.6
                                                       0.4
                                                                                      0.4
                        0.2
                         0                             0.2 0          *#              0.2 0          *#
                            A   B   C  D   E               A   B   C  D   E               A   B   C  D   E

                    A:control组;B:si⁃NC组;C:si⁃NEAT1组;D:si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组;E:si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor组。与control组相比,P < 0.05;与
                                                                                                        *
                si⁃NC组相比,P < 0.05;与si⁃NEAT1组相比,P < 0.05;与si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组相比,P < 0.05;n=6。
                                             &
                         #
                                                                           ∆
                                     图3 各组细胞中Ki⁃67、E⁃cadherin、N⁃cadherin、Vimentin蛋白表达
                         Figure 3 Expression of Ki⁃67,E⁃cadherin,N⁃cadherin and Vimentin proteins in cells of each group
                2.6  双荧光素酶报告基因检测结果                                著降低(P < 0.05);与si⁃NEAT1组、si⁃NEAT1+inhibi⁃
                    使用生物信息学工具预测到 miR⁃29c⁃3p 包含                    tor⁃NC 组相比,si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor 组肿
                lnc⁃NEAT1 和 CSPG4 的结合位点(图 4A、C)。双荧                瘤体积和重量显著升高(P < 0.05,图5)。
                光素酶报告基因检测结果显示,与转染 miR⁃NC 相                        2.8  敲低NEAT1对裸鼠移植瘤中lnc⁃NEAT1、miR⁃
                比,转染miR⁃29c⁃3p mimic后,细胞中NEAT1⁃WT和                29c⁃3p、CSPG4表达水平的影响
                CSPG4⁃WT的荧光素酶活性显著降低(P < 0.05),而                       与 si⁃NC 组相比,si⁃NEAT1 组肿瘤组织中 lnc⁃
                NEAT1⁃MUT和CSPG4⁃MUT的荧光素酶活性未受显                     NEAT1、CSPG4 mRNA 和蛋白水平显著降低,miR⁃
                著影响(P > 0.05,图4B、D)。                              29c⁃3p水平显著升高(P < 0.05);与si⁃NEAT1组、si⁃
                2.7  敲低NEAT1对裸鼠移植瘤生长的影响                           NEAT1+inhibitor⁃NC 组相比,si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p
                    裸鼠体内致瘤性实验结果显示,在第 2、3、4 周                      inhibitor 组肿瘤组织中 CSPG4 mRNA 和蛋白水平显
                时,与si⁃NC组相比,si⁃NEAT1组肿瘤体积和重量显                     著升高,miR⁃29c⁃3p水平显著降低(P < 0.05,图6)。
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