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第43卷第4期 谢 奇,樊鑫梅,韩永红,等. lnc⁃NEAT1通过miR⁃29c⁃3p/CSPG4信号轴调节黑色素瘤B16细
2023年4月 胞的增殖、迁移和侵袭[J]. 南京医科大学学报(自然科学版),2023,43(04):492⁃501 ·497 ·
表5 各组细胞迁移、侵袭能力比较
Table 5 Comparison of migration and invasion abilities in cells of each group (x ± s,n=6)
组别 迁移细胞数(个) 侵袭细胞数(个)
control组 131.28 ± 14.90 107.36 ± 13.58
si⁃NC组 134.04 ± 15.26 112.15 ± 14.30
si⁃NEAT1组 058.62 ± 7.75 *# 045.84 ± 7.61 *#
si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组 053.54 ± 8.16 *# 042.90 ± 8.02 *#
si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor组 116.32 ± 13.40 &∆ 089.26 ± 10.15 &∆
与control组相比,P < 0.05;与si⁃NC组相比,P < 0.05;与si⁃NEAT1组相比,P < 0.05;与si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组相比,P < 0.05。
*
&
#
∆
herin蛋白水平显著升高(P < 0.05);与si⁃NEAT1组、 3p inhibitor组Ki⁃67、N⁃cadherin与Vimentin蛋白水平
si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组相比,si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃ 显著升高,E⁃cadherin蛋白水平显著降低(P < 0.05,图3)。
A B C D E
Ki⁃67 358 kDa 0.8
&Δ
Ki⁃67/GAPDH 0.4 *# *#
E⁃cadherin 97 kDa 0.6
N⁃cadherin 100 kDa 0.2
Vimentin 54 kDa
0
A B C D E
GAPDH 36 kDa
0.8
*# *#
E⁃cadherin/GAPDH 0.4 &Δ N⁃cadherin/GAPDH 0.6 *# &Δ Vimentin/GAPDH 0.8 *# &Δ
0.6
0.6
0.4
0.4
0.2
0 0.2 0 *# 0.2 0 *#
A B C D E A B C D E A B C D E
A:control组;B:si⁃NC组;C:si⁃NEAT1组;D:si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组;E:si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor组。与control组相比,P < 0.05;与
*
si⁃NC组相比,P < 0.05;与si⁃NEAT1组相比,P < 0.05;与si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组相比,P < 0.05;n=6。
&
#
∆
图3 各组细胞中Ki⁃67、E⁃cadherin、N⁃cadherin、Vimentin蛋白表达
Figure 3 Expression of Ki⁃67,E⁃cadherin,N⁃cadherin and Vimentin proteins in cells of each group
2.6 双荧光素酶报告基因检测结果 著降低(P < 0.05);与si⁃NEAT1组、si⁃NEAT1+inhibi⁃
使用生物信息学工具预测到 miR⁃29c⁃3p 包含 tor⁃NC 组相比,si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor 组肿
lnc⁃NEAT1 和 CSPG4 的结合位点(图 4A、C)。双荧 瘤体积和重量显著升高(P < 0.05,图5)。
光素酶报告基因检测结果显示,与转染 miR⁃NC 相 2.8 敲低NEAT1对裸鼠移植瘤中lnc⁃NEAT1、miR⁃
比,转染miR⁃29c⁃3p mimic后,细胞中NEAT1⁃WT和 29c⁃3p、CSPG4表达水平的影响
CSPG4⁃WT的荧光素酶活性显著降低(P < 0.05),而 与 si⁃NC 组相比,si⁃NEAT1 组肿瘤组织中 lnc⁃
NEAT1⁃MUT和CSPG4⁃MUT的荧光素酶活性未受显 NEAT1、CSPG4 mRNA 和蛋白水平显著降低,miR⁃
著影响(P > 0.05,图4B、D)。 29c⁃3p水平显著升高(P < 0.05);与si⁃NEAT1组、si⁃
2.7 敲低NEAT1对裸鼠移植瘤生长的影响 NEAT1+inhibitor⁃NC 组相比,si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p
裸鼠体内致瘤性实验结果显示,在第 2、3、4 周 inhibitor 组肿瘤组织中 CSPG4 mRNA 和蛋白水平显
时,与si⁃NC组相比,si⁃NEAT1组肿瘤体积和重量显 著升高,miR⁃29c⁃3p水平显著降低(P < 0.05,图6)。