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第43卷第4期 谢 奇，樊鑫梅，韩永红，等. lnc⁃NEAT1通过miR⁃29c⁃3p/CSPG4信号轴调节黑色素瘤B16细
2023年4月 胞的增殖、迁移和侵袭［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（04）：492⁃501 ·493 ·

targeting relationship with lnc⁃NEAT1 and CSPG4. Nude mice xenograft experiment was performed to explore the effect of lnc⁃NEAT1
knockdown on the growth of MM cells in vivo. Results：The mRNA levels of lnc⁃NEAT1 and CSPG4 in MM cell lines were obviously
higher than those in HEMa⁃LP cells，and the levels of miR⁃29c⁃3p were obviously lower than those in HEMa⁃LP cells（all P < 0.05）.
Knockdown of lnc⁃NEAT1 obviously increased miR⁃29c⁃3p expression，decreased CSPG4 mRNA and protein levels，inhibited cell
proliferation，migration and invasion，and decreased Ki⁃67，N⁃cadherin and Vimentin protein levels as well as increased E⁃cadherin
protein level（all P < 0.05）. Down⁃regulation of miR⁃29c⁃3p expression obviously increased CSPG4 mRNA and protein levels，and
attenuated the inhibitory effects of lnc⁃NEAT1 knockdown on MM cell proliferation，migration and invasion（P < 0.05）. The results of
dual⁃luciferase reporter gene assay showed that after the transfection of miR⁃29c⁃3p mimic，the luciferase activities of NEAT1⁃WT and
CSPG4⁃WT in cells were obviously decreased（P < 0.05）. Nude mouse xenograft experiments showed that knockdown of lnc⁃NEAT1
obviously inhibited the growth of xenografts in vivo，while inhibition of miR⁃29c⁃3p was able to obviously attenuate the inhibitory effect
of lnc⁃NEAT1 knockdown on the growth of xenografts（all P < 0.05）. Conclusion：Lnc⁃NEAT1 may promote the proliferation，migration
and invasion of MM cells by regulating the miR⁃29c⁃3p/CSPG4 axis.
［Key words］ melanoma；long non⁃coding RNA nuclear enriched abundant transcript 1；microRNA⁃29c⁃3p；chondroitin sulfate
proteoglycan 4；proliferation；migration；invasion
［J Nanjing Med Univ，2023，43（04）：492⁃501］

黑色素瘤（melanoma，MM）是一种侵袭性皮肤
恶性肿瘤，约占全球皮肤恶性肿瘤相关死亡人数的 1 材料和方法
［1］
80%，发病率呈上升趋势 。因此，鉴定 MM 的新诊 1.1 材料
断标志物和治疗靶点势在必行。研究表明，长链非 1.1.1 细胞
编码 RNA（long non⁃coding RNA，lncRNA）可以通过 人MM细胞系（A375、A875、M14）和小鼠黑色素
调节靶基因表达调控大多数恶性肿瘤的形成和发 瘤细胞系（B16）购自武汉普诺赛生命科技有限公司
［2］
展，包括 MM 。据报道，lncRNA⁃核富集转录本 1 （货号：CL⁃0014、CL⁃0255、CL⁃0287、CL⁃0029），在含
（nuclear enriched abundant transcript 1，lnc⁃NEAT1） 10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素、100 μg/mL 链霉素
在MM中过度表达，可促进MM细胞的增殖、迁移和 的 DMEM 培养基中生长。人表皮黑色素细胞（HE⁃
侵袭 ［3-4］ 。然而，lnc⁃NEAT1 在 MM 中作用机制仍未 Ma⁃LP）购自上海北诺生物科技有限公司（货号：
完全阐明。 C0245C），培养于含有人黑素细胞生长添加剂⁃2
lncRNA可以作为微小RNA（microRNA，miRNA） （HMGS⁃2）的 M254 培养基中。以上这些细胞系置
海绵或竞争性内源性 RNA（competing endogenous 于37 ℃的5% CO2加湿培养箱中培养。
RNA，ceRNA）介导信使RNA（messenger RNA，mRNA） 1.1.2 主要试剂与仪器
表达以实现其生物学功能。miR⁃29c⁃3p 是 miR⁃29 胎牛血清（Gibco 公司，美国）；MTT 细胞增殖及
家族成员，通过调控基因表达参与MM进展，对评估 细胞毒性检测试剂盒（上海碧云天生物科技有限公
患者预后具有重要价值 ［5-6］ 。硫酸软骨素蛋白多糖4 司）；lnc⁃NEAT1干扰质粒（si⁃NEAT1）和对照干扰质
（chondroitin sulfate proteoglycan 4，CSPG4）是一种在 粒（si⁃NC）、miR⁃29c⁃3p 模拟物（miR⁃29c⁃3p mimic）
人 MM 细胞中发现的跨膜蛋白多糖，参与 MM 的迁 和对照（miR⁃NC）、miR⁃29c⁃3p 抑制剂（miR⁃29c⁃3p
移和侵袭，与MM的形成和预后不良有关，是MM中 inhibitor）和对照（inhibitor⁃NC）由上海 GenePharma
的关键癌基因 ［7-8］ 。生物信息学分析显示lnc⁃NEAT1 公 司 构 建 ；Lipofectamine 3000 转 染 试 剂（Sigma⁃

和miR⁃29c⁃3p之间可能存在靶向调控作用，且miR⁃ Aldrich公司，美国）；Transwell小室（Corning公司，美
29c⁃3p 可 与 CSPG4 的 3′⁃ 非 翻 译 区（untranslated 国）；兔源一抗CSPG4、Ki⁃67、E⁃钙黏蛋白（E⁃cadherin）、
region，UTR）结合。因此，本研究试图探究lnc⁃NEAT1、 N⁃钙黏蛋白（N⁃cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、
miR⁃29c⁃3p 和 CSPG4 之间的关系，并进一步分析 甘油醛⁃3⁃磷酸脱氢酶（glyceraldehyde⁃3⁃phosphate
lnc⁃NEAT1/miR⁃29c⁃3p/CSPG4调节轴在MM进展中 dehydrogenase，GAPDH）（Abcam 公司，英国）；双荧
的可能作用。 光 素 酶 报 告 基 因 检 测 试 剂 盒（Promega 公 司 ，美