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第43卷第6期      扎西吉，张    赟，马凤美，等. 基于PKC/ERK通路探讨败酱总黄酮对缺氧缺血性脑病新生大鼠神经元
                  2023年6月               凋亡的影响［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（6）：786-794                    ·793 ·


                A                                 B                               C
                          1    2    3    4              1.0                            1.0
                  p⁃PKC                     75 kDa      0.8             #              0.8
                    PKC                     75 kDa      0.6                 △          0.6             #
                                            44 kDa   p⁃PKC/PKC  蛋白相对表达水平  *         p⁃ERK1/2/ERK1/2 蛋白相对表达水平  △
                 p⁃ERK1/2                               0.4                            0.4
                                            42 kDa                                                *
                                            44 kDa      0.2                            0.2
                  ERK1/2
                                            42 kDa
                                                         0                              0
                 GAPDH                      36 kDa
                                                             1    2     3    4               1    2    3    4
                   A：Western blot 检测各组海马神经元 PKC/ERK 通路相关蛋白的表达；B：各组 p⁃PKC/PKC 相对表达量；C：各组 p⁃ERK1/2/ERK1/2相对表达
                量。1：对照组；2：OGD/R组；3：败酱总黄酮组；4：败酱总黄酮+白屈菜红碱组。与对照组相比，P＜0.05；与OGD/R组相比，P＜0.05；与败酱总
                                                                                *
                                                                                                   #
                黄酮组相比，P＜0.05（n=6）。
                         △
                                            图8 各组海马神经元PKC/ERK通路相关蛋白表达
                         Figure 8 Expression of PKC/ERK pathway⁃related proteins in hippocampal neurons in each group
                过结扎右颈总动脉和低氧处理以模拟缺氧缺血环境                            组显著降低，且使用PKC抑制剂白屈菜红碱干预的
                建立了新生大鼠HIE模型，发现模型大鼠表现出明显                          HIE 模型大鼠神经功能损伤进一步加重，并伴随着
                的神经功能损伤，海马神经元数量减少，神经元凋亡                           Caspase⁃3、Bax 表达增加，Bcl⁃2 表达减少，说明 HIE
                增加，并伴随着促凋亡蛋白Bax、Caspase⁃3 表达的升                    新生大鼠脑组织 PKC/ERK 通路被抑制。在 OGD/R
                高；与以往研究结果一致，表明 HIE 新生大鼠神经                         细胞模型中也观察到一致的趋势。败酱总黄酮可
                元凋亡增加。因此，增强内源性抗凋亡机制的治疗                            升高 HIE 大鼠脑组织中 p⁃PKC/PKC、p⁃ERK1/2/ERK1/2
                策略可能是减少HIE患者神经损伤的安全方法。                            比值，白屈菜红碱明显减弱了体内和体外败酱总黄
                    败酱总黄酮能够抑制脑缺血再灌注大鼠的神                           酮对PKC/ERK通路的激活作用，削弱了败酱总黄酮
                经元凋亡，有助于受损神经元的修复，促进神经功                            对海马神经元凋亡的抑制作用。提示败酱总黄酮
                能恢复   ［8-10］ 。本研究结果显示，经败酱总黄酮干预                    可能通过激活 PKC/ERK 通路减少 HIE 新生大鼠海
                后，HIE新生大鼠的神经功能明显改善，海马神经元                          马神经元凋亡。
                密度增加，凋亡神经元数量减少，同时促凋亡标志                                然而，PKC 在缺血性脑损伤中的作用存在争
                物 Caspase⁃3、Bax 表达减少，而抗凋亡标志物 Bcl⁃2                议。大多数阐明 PKC 作用的研究提示在缺血性损
                增加，表明败酱总黄酮可抑制 HIE 诱导的神经元凋                         伤后，总 PKC 水平和活性迅速下降，这表明 PKC 在
                亡。体外实验显示，败酱总黄酮增加了海马神经元                            这些条件下被降解         ［6，16-17］ 。但另一些研究表明，在脑
                细胞活力，挽救了神经元损伤并减少了OGD/R损伤                          缺血损伤早期和 OGD/R 诱导的小胶质细胞中，
                后的细胞凋亡，与体内研究结果一致，进一步证实                            PKC 水平和 PKC 活性增加，可诱导小胶质细胞产
                败酱总黄酮可减少HIE后海马神经元凋亡。                              生促炎介质      ［18-19］ ；用 PKC 抑制剂处理细胞可保护
                    PKC/ERK 通路是一种离子通道活性调节剂。                       神经元免受谷氨酸诱导的细胞死亡                  ［20］ 。这些研究
                据报道，在δ⁃阿片受体（DOR）介导的缺氧/缺血应激
                                                                  结果不一致的原因可能是动物模型不同，大脑区
                的神经保护中，其增强K 稳态的作用依赖于PKC途
                                      +
                                                                  域不同，缺血/再灌注损伤的持续时间和强度不同，
                径和 ERK、Bcl⁃2 活性的增加       ［15］ 。另有研究显示，在
                                                                  也可能是不同的 PKC 同工酶产生相反作用。
                缺氧神经元中，PKC/ERK 通路的激活可增强 Bcl⁃2
                                                                      综上所述，败酱总黄酮可抑制 HIE 新生大鼠海
                活性，抑制细胞色素 C 的释放，保护神经元                  ［16］ 。此
                                                                  马神经元凋亡，其作用机制可能与激活PKC/ERK通
                外，近年来不少研究发现激活发育中的海马神经元
                                                                  路有关。本研究进一步验证了败酱总黄酮的神经
                中的 PKC/ERK通路，可抑制氯胺酮诱导的海马神经
                                                                  保护作用，为 HIE 的治疗提供实验参考。但其介导
                元早期和晚期凋亡 。在脑出血小鼠模型中，PKC活
                                ［17］
                                                                  的神经元凋亡是否与 HIE 期间炎症或氧化应激有
                性的敲低降低了p⁃ERK1/2、Bcl⁃2表达，升高了Caspase
                                                                  关，仍有待确定。此外，败酱总黄酮能否影响其他
                ⁃3表达，导致氧化应激反应加重和神经元凋亡增加，
                                                                  脑组织区域（如皮质、CA2、CA3 区）改善新生儿
                                                      ［6］
                而激活PKC/ERK通路则表现出相反的作用 。以上
                                                                  HIE，有待进一步深入研究。
                研究表明 PKC/ERK 通路在神经元凋亡中具有重要
                作用。与既往研究一致，本研究 HIE 模型大鼠的脑                        ［参考文献］
                组织中p⁃PKC/PKC、p⁃ERK1/2/ERK1/2的比值较假手术              ［1］ WALAS W，WILINSKA M，BEKIESINSKA F M，et al.
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