Page 10 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第8期
·1044 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年8月

A
2.0 20 80 2.5
** 60 ** * 2.0
VPS13A相对表达量 1.0 *** PPARγ相对表达量 10 * CEBPα相对表达量 40 CEBPβ相对表达量 1.5
***
15
**
1.5
1.0
0.5
0 5 0 20 0 0.5 0
0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8
时间（d） 时间（d） 时间（d） 时间（d）
B 0 d 2 d 4 d 6 d 8 d
VPS13Λ 360 kDa
CEBPα 43 kDa
CEBPβ 36 kDa
PPARγ 55 kDa
CALNEIN 90 kDa
***
**
*
A：Q⁃PCR 检测 3T3⁃L1 细胞分化过程中 VPS13A 及标志蛋白 PPARγ、CEBPα、CEBPβ的转录水平；与 0 d 比较，P < 0.05，P < 0.01， P <
0.001；B：Western blot检测3T3⁃L1细胞分化过程中VPS13A及标志蛋白PPARγ、CEBPα、CEBPβ的表达水平。
图1 VPS13A在3T3⁃L1细胞分化过程中的表达
Figure 1 VPS13A expression analysis during 3T3⁃L1 cell differentiation
行分化后，敲降了 VPS13A 的细胞内分化成熟的脂 细胞蛋白 Western blot 检测分化相关标志蛋白的表
肪细胞更多，分化效率更高（图3）。 达，发现分化标志蛋白PPARγ和CEBPα在分化后明
2.4 敲降VPS13A促进3T3⁃L1细胞分化 显升高（图 4C），表明脂肪细胞分化成功；在此基础
脂肪细胞分化过程对脂肪细胞的功能具有至 上我们发现分化标志蛋白CEBPβ、PPARγ和CEBPα
关重要的作用，为了进一步探究 VPS13A 是否对脂 在 VPS13A 敲降组的水平明显高于对照组（图 4C），
肪细胞分化有影响。将感染对照病毒的 3T3⁃L1 细 这一结果提示VPS13A在脂肪细胞中敲降后能促进
胞系和VPS13A稳定敲降的3T3⁃L1细胞系进行分化 脂肪细胞的分化。
处理，发现敲降 VPS13A 能促进脂肪细胞分化。对
3 讨 论
分化后的细胞进行 BODIPY 和油红染色，发现敲降
VPS13A 的脂肪细胞分化 8 d 后的脂滴水平明显高 肥胖症由脂肪组织的过度扩张和增生所导致，
于对照组细胞（图 4A、B）。提取分化前和分化后的 肥胖与代谢性疾病和癌症的发生密切相关，因此构

A
1.5 P＜0.01 sg⁃NC sg⁃VPS13Λ
VPS13A相对表达量 1.0 0 d

0.5

0
sg⁃NC sg⁃VPS13Λ
B sg⁃NC sg⁃VPS13Λ
VPS13Λ 360 kDa
8 d
CALNEIN 90 kDa
A：Q⁃PCR 检测稳定敲降 VPS13A 基因的 3T3⁃L1 细胞系中
VPS13A 的表达水平；B：Western blot 检测稳定敲降 VPS13A 基因的 3T3⁃L1未分化前的细胞形态与3T3⁃L1细胞经过诱导分化8 d后
3T3⁃L1细胞系中VPS13A的表达水平。 的形态（×400）。
图2 构建稳定敲降VPS13A基因的3T3⁃L1细胞系 图3 3T3⁃L1细胞诱导分化8 d后细胞成长为成熟脂肪细胞
Figure 2 The establishment of a VPS13A knockout 3T3⁃ Figure 3 3T3⁃L1 cells induce the growth of mature adipo⁃
L1 stable cell line cytes after 8 d differentiation