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第43卷第8期 曹 清，秦 丽，刘 娟. V11β⁃羟化类固醇脱氢酶敲除对高脂饮食喂养小鼠认知功能的影响［J］.
2023年8月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（8）：1047-1054 ·1049 ·

区神经元超微结构。 功能的关键因子，为了再次明确 11β⁃HSD1 对机体
1.2.8 石蜡切片及免疫荧光 整体代谢的影响，将 C57BL/6J 的野生对照小鼠与
取海马体组织，4％甲醛固定24 h后脱水，使用常 11β⁃HSD1基因敲除小鼠高脂饮食20周后，观察11β⁃
规石蜡包埋后将海马体切片脱蜡，10%山羊血清封闭 HSD1 基因敲除小鼠体重，发现显著性上升（P <
30 min，加一抗（anti⁃BDNF，GB11240，武汉Servicebio 0.001，图 1A、B）。留取两组小鼠的皮下脂肪、内脏
公司）、（anti⁃IL⁃1β，GB11113，武汉Servicebio公司）， 脂肪和棕色脂肪组织，并对其进行称重，结果显示
4 ℃过夜，PBS 清洗 3 次后加二抗（CY3 标记山羊抗 11β⁃HSD1 基因敲除组小鼠的皮下脂肪重量显著高
兔），37 ℃孵育30 min，加DAPI染液，37 ℃继续孵育 于野生对照组小鼠（P < 0.05），而内脏脂肪和棕色脂
30 min，再次PBS清洗切片3次；用抗荧光衰减封片剂 肪重量并没有明显差异（图1C、D）。糖耐量试验和胰
封片，使用免疫荧光显微镜观察并采集图像。 岛素耐量试验结果显示，随着体重的上升，11β⁃HSD1

1.2.9 RT⁃PCR 敲除组小鼠的糖耐量（图1E）及胰岛素耐量（图1F）未
取小鼠海马组织，提取组织 RNA，并测定 RNA 有明显改变。肌肉力量测定结果显示，11β⁃HSD1敲
的含量和纯度。将 RNA 逆转成 cDNA 为模板，用相 除组小鼠抓力明显高于对照组（P < 0.001，图1G）。
关引物进行 RT⁃PCR 扩增（ABI7000，StepOne⁃Plus， 为了进一步明确小鼠体重变化的原因，我们对小
美国）。总反应体系为10 μL，反应条件：95 ℃预变性 鼠进行能量代谢评估。代谢笼检测结果显示：11β⁃
5 min；94 ℃变性15 s，60 ℃退火延伸15 s，40个循环； HSD1敲除组与野生对照组相比，虽然摄食量、饮水量
72~94 ℃，每升高 0.5 ℃读 1 次制备熔解曲线。以 没有显著差别（图2A、B），但是身体活动量（图2C）、
Actin基因作为内参，对目的基因的表达量进行分析。 VCO2 （图 2F）有下降趋势，产热量（P < 0.05，图 2D）、
1.3 统计学方法 VO2 （P < 0.05，图2E）显著下降。
统计学方法将相关数据导入excel进行整理，用 2.2 11β⁃HSD1基因敲除高脂喂养小鼠认知功能的
GraphPad Prism 8 统计软件进行分析，采用 t 检验进 改变
行两组比较。P < 0.05为差异有统计学意义。 为了评估11β⁃HSD1基因敲除高脂喂养小鼠认
知功能的改变，对小鼠进行了行为学测试。水迷宫
2 结 果
测试结果显示，与野生对照组相比，11β⁃HSD1敲除
2.1 11β⁃HSD1基因敲除高脂喂养小鼠整体代谢的 组可以迅速、准确地找到平台所在的象限和位置
改变 （图 3A）；敲除组高脂喂养小鼠第 1 天学习期（P <
既往已有大量研究证实11β⁃HSD1是调控脂肪 0.05）、第3天学习期（P < 0.001）、第5天记忆期（P <

A B C D
WT KO *
60 *** WT KO 4 WT
（ g ） 55 BAT （ g 3 ） KO
50
SAT
Weight 45 VAT 1 Weight 2
40
35 0
WT KO BAT SAT VAT
E F G
WT ***
40 WT * 25 KO 240
（ mmol/L） 30 KO （ mmol/L） 20 （ g ） Grip 200
220
15
180
20
GTT 10 ITT 10 5 160
140
0 time（min） 0 time（min） 120
0 15 30 45 60 120 0 15 30 45 60 120 WT KO
A：小鼠大体图；B：小鼠体重对比；C：小鼠肩胛间棕色脂肪组织（BAT）、皮下脂肪组织（SAT）、内脏脂肪组织（VAT）的大体图；D：小鼠脂肪
重量对比；E：小鼠葡萄糖耐受试验；F：小鼠胰岛素耐受试验；G：小鼠肌肉力量测定。两组比较，P < 0.05， P < 0.001；肌肉力量测定n=15，其
***
*
余n=5。
图1 11β⁃HSD1基因敲除小鼠高脂喂养饮食整体代谢的评估
Figure 1 Assessment of global metabolism in 11β⁃HSD1 knockout mice fed with high⁃fat diet