Page 36 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第8期
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              射 Dox 20 mg/kg，然后每 24 h 尾静脉注射 1 次 Lido，           灰度分析并统计。
              连续 7 d）、Lido 组（尾静脉注射 Lido 5 mg/kg，每 24 h          1.2.7 激光多普勒考察小鼠足底微循环
              尾静脉注射 1 次，连续 7 d）。每天称量小鼠体重及                            在对小鼠进行足底血流检测当天，将小鼠置于
              观察死亡率并记录。                                         小动物麻醉机的诱导箱中，调至合适的异氟烷气体
              1.2.2 心电图检测                                       浓度对小鼠进行麻醉，麻醉后将小鼠放置于 moor⁃
                  各组小鼠于注射前 1 h 和注射后 7 d 用气麻机                    FLPI2 多普勒散斑血流仪的镜头下，同时将小鼠口
              麻醉小鼠（麻药为异氟烷，浓度 3%）后进行心电图                          鼻置于维持麻醉导管处，将小鼠足底放在镜头中
              检测。将电极置于右前肢、右后肢和左后肢的皮肤                            央，进行连续 10 s 的血流检测，中途小鼠不能移动，
              下，使用小动物心电图机器记录结果，待小鼠心率                            拍摄结束后，对小鼠足底血流值进行分析、统计。
              及波形稳定后开始记录Ⅱ导联心电图，每次记录的                            1.3  统计学方法
              持续时间至少为2 min。                                          应用 GraphPad Prism9 软件处理数据。两组数
              1.2.3 超声心动图检测                                     值采用 Student’s t 检验分析比较，四组数值采用单
                  注射 7 d 后进行心脏超声检测，检测前给小鼠                       向方差分析中的 Bonferroni 多重比较检验，P < 0.05
              备皮，采用异氟烷麻醉小鼠，将小鼠置于检测台                             为差异有统计学意义。
              上。四肢以及胸前涂抹导电凝胶，同时检测小鼠心
                                                                2  结 果
              律，呼吸以及心脏超声。对小鼠左心室各项指标
             （射血分数，缩短分数，舒张和收缩末期内径和容                             2.1 利多卡因对急性心肌损伤小鼠具有保护作用
              积）进行测量分析。                                              单次腹腔注射Dox 20 mg/kg建立急性心肌损伤
              1.2.4 心肌细胞损伤程度评估                                  模型，观察组间小鼠状态发现，Saline组与Lido组小
                  注射后7 d提取各组小鼠血液样本，制备成血浆                        鼠皮毛柔顺，活动正常，饮食与大、小便均正常；Dox
              并保存在-80 ℃环境中。于南京医科大学动物实验                          组与 Dox+Lido 组小鼠第 3 天开始出现活动减少，皮
              中心使用全自动生化仪检测血浆中的肌酸磷酸激酶                            毛干枯，纳差，其中Dox组出现炸毛，Dox+Lido组第5
              同工酶（creatine kinase⁃MB，CK⁃MB）及肌钙蛋白 I              天开始逐渐恢复，而Dox组持续状态不佳，甚至出现
             （cardiac troponin I，cTnI）值并记录结果。                   死亡。
              1.2.5 HE染色                                             注射 Dox 后第 7 天取材，比较心脏大小，Dox 组
                  注射 7 d 取材灌注取小鼠的心脏，4%多聚甲醛                      小鼠心脏明显挛缩，Dox+Lido 组较 Dox 组明显改善
              固定后，进行石蜡包埋，纵切心脏。脱蜡，苏木素染                           （图 1A、B），说明利多卡因对小鼠心脏具有保护作
              色，洗涤；伊红染色，脱水，晾干，封片。显微镜镜                           用。组间死亡率结果显示，Dox 组小鼠在给予 Dox
              检，图像采集分析。                                         注射后第 5 天死亡率即达到了 60%，利多卡因治疗
              1.2.6 Western blot法                               组显著增加小鼠存活率（图 1C）。并且 4 组小鼠体
                  注射后7 d提取各组小鼠心脏样本在放射免疫                         重变化差异也较为明显，第 7 天时 Dox 小鼠体重较
              沉淀分析（radio immunoprecipitation assay，RIPA）裂       前下降了 40%，Dox+Lido 组较 Dox 组小鼠体重下降
              解缓冲液中进行裂解，测定心肌组织中蛋白的表                             较慢（图1D），对心脏进行HE染色，发现利多卡因能
              达，蛋白质浓度由BCA蛋白质测定法测定。装载蛋                           显著改善阿霉素引起的心肌细胞损伤（图1E），以上

              白质并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide                     结果从一定程度反映了利多卡因对Dox导致的心脏
              gel electrophoresis，SDS⁃PAGE）分离后在电泳转移到            毒性抵抗作用。
              聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidenefluoride，PVDF）上。            2.2  利多卡因显著缓解 Dox 诱导的心电活动异常
              膜在室温下用 5％牛血清白蛋白封闭 2 h，在 4 ℃下                      及心肌坏死
              用一抗孵育过夜，洗涤3次每次10 min，使用的主要                             为了进一步评价利多卡因的心脏保护作用，对

              抗 体 包 括 TF（1∶1 000）、MMP⁃9（1∶1 000）、p⁃             不同组间小鼠心电图情况进行考察，实验结果发
              AMPK（1∶1 000）、Cx43（1∶1 000）、β⁃actin（1∶1 000）；然    现，Dox组小鼠的心率出现明显的降低，并且 QRS波
              后用辣根过化物酶联的二抗孵育。洗膜3次，加增强                           时程增加，QT 间期延长，利多卡因治疗组可明显改
              型 化 学 发 光 试 剂（enhanced chemiluminescence，         善以上情况（图2A~D）。进一步检测了小鼠血清的
              ECL）显色，并进行图像采集。用 Image J 软件进行                     心肌损伤标志物 CK⁃MB，cTnI，实验结果表明，Dox
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