Page 46 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第8期
·1080 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年8月

A B
shRNA⁃sc 10 000 10 000 10 000
PI PI PI
shRNA⁃MVP 800 24.6% 800 45.4% 800 18.4%
（ % of shRNA⁃sc） 150 SSC⁃H 600 SSC⁃H 600 SSC⁃H 600
**
**
200
400
400
400
100
200
200
200
PI阳性 50 0 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
TNF⁃α + + + FL2⁃H FL2⁃H FL2⁃H
TNF⁃α + + +
Z⁃VAD - - +
Z⁃VAD - - +
C D
shRNA⁃sc 10 000 PI 10 000 PI 10 000 PI
shRNA⁃MVP 800 21.4% 800 39.7% 800 39.6%
（ % of shRNA⁃sc） 200 SSC⁃H 600 SSC⁃H 600 SSC⁃H 600
ns
**
250
400
400
400
150
200
200
200
100
PI阳性 50 0 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
FL2⁃H FL2⁃H FL2⁃H
TNF⁃α + + +
TNF⁃α + + +
Nec⁃1 - - +
Nec⁃1 - - +
E F G
TNF⁃α
shRNA⁃sc shRNA⁃sc shRNA⁃MVP - - - + - +
shRNA⁃sc） 250 * * ** 3活性 150 ** ** ** cleaved Casapse 3 17 kDa
shRNA⁃MVP
+
shRNA⁃MVP
+
200
（ % of 150 Casapse （ % of shRNA⁃sc） 200 Tubulin 55 kDa
100
100
AV阳性 50 0 Control TNF⁃α 0 Control TNF⁃α
50
H 200 Lenti⁃con I Lenti⁃con J Lenti⁃MVP - - - + - +
TNF⁃α
（ % of Lenti⁃con） 150 * ** ** 3活性 （ % of Lenti⁃con） 200 ** ** * cleaved Casapse 3 17 kDa
+
+
Lenti⁃MVP
Lenti⁃MVP
150
100
100
Tubulin
55 kDa
AV阳性 50 0 Casapse 50 0
Control TNF⁃α Control TNF⁃α
A~D：流式细胞术检测Z⁃VAD（50 μmol/L）（A、B）、Nec⁃1（50 μmol/L）（C、D）对敲降MVP后HAEC死亡的影响（n=4）；E、F：流式细胞术检测
敲降MVP后细胞的Annexin V结合（E）和Caspase 3活性（F）（n=4）；G：Western blot检测敲降MVP后Caspase 3剪切体蛋白表达；H、I：流式细胞
术检测过表达MVP后Annexin V阳性率（H）和Caspase 3活性（I）（n=4）；J：Western blot检测过表达MVP后Caspase 3剪切体蛋白表达。两组比
较，P < 0.05，P < 0.01。
**
*
图2 MVP抑制TNF⁃α诱导的HAEC凋亡
Figure 2 MVP inhibited TNF⁃α⁃induced HAEC apoptosis
MVP 时显著降低（P < 0.05，图 3C）。Western blot 检 2.4 cIAP1敲降逆转MVP过表达导致的凋亡抑制
测其蛋白水平变化，发现敲降 MVP 降低 cIAP1 的 为了探究 MVP 是否通过 cIAP1 调控 HAEC 凋
蛋白表达，过表达 MVP 升高 cIAP1 的蛋白表达，而 亡，使用 cIAP1 siRNA 降低 cIAP1 的表达（图 4A）。
MVP 的缺失或过表达对 cIAP2 的蛋白表达水平都 流式细胞术结果显示，与对照组相比，敲降cIAP1恢
无明显的影响（图 3D、E）。定量 PCR 结果显示，在 复了过表达 MVP 导致的 Caspase 3 活性、Caspase 3
基底以及 TNF⁃α处理条件下，过表达 MVP 均增加 剪切体蛋白表达以及 Anneexin V 阳性率降低（P <
cIAP1 的 mRNA 表达水平（P < 0.05，图 3F）。 0.01，图 4B~E）。 这 些 结 果 表 明 MVP 通 过 增 加