Page 47 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第8期 薛佳佳，王艺颖，胡成秀，等. 穹窿主体蛋白通过上调干扰素调节因子2抑制动脉内皮细胞凋亡［J］.
2023年8月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（8）：1076-1084 ·1081 ·
cIAP1的转录表达进而抑制HAEC凋亡。 过JASPAR网站预测转录因子干扰素调节因子2（in⁃
2.5 MVP通过上调IRF2介导cIAP1表达升高，实现 terferon regulatory factor 2，IRF2）可与 BIRC2 启动子
对凋亡的抑制 结合，因此将IRF2作为下一步探究靶标。免疫印迹
为了进一步探究 MVP 对 cIAP1 的作用机制，通 结果显示，过表达MVP上调IRF2蛋白表达水平（图
A B C
shRNA⁃sc Lenti⁃con shRNA⁃MVP
shRNA⁃MVP Lenti⁃MVP * 100
**
***
300
Casapse8活性 （ % of shRNA⁃sc） 350 * ** Casapse8活性 （ % of Lenti⁃con） 200 * mRNA水平 （ % of shRNA⁃sc） 150
250
150
200
50
100
150
100
50
TRADD
0 50 0 0 MVP FADD FLIP RIP1 clAP1 clAP2 CYLD TNFR1 TRAF2
Control TNF⁃α Casapse8
Control TNF⁃α
shRNA⁃MVP
D E F
TNF⁃α - - + + TNF⁃α - - + + *
shRNA⁃MVP - + - + Lenti⁃MVP - + - + Lenti⁃con
mRNA水平
cIAP2 70 kDa cIAP1 70 kDa 200 * Lenti⁃MVP
150
cIAP1 62 kDa cIAP2 62 kDa （ % of Lenti⁃con） 250
100
cIAP1 50
β⁃actin 42 kDa β⁃actin 42 kDa
0
Control TNF⁃α
A、B：流式细胞术检测敲降（A）和过表达MVP（B）后细胞Caspase 8活性（n=4）；C：荧光定量PCR 法检测在TNF⁃α处理的细胞中敲降MVP
后Caspase 8通路相关分子的mRNA表达水平（n=4）；D、E：Western blot 检测敲降（D）和过表达MVP（E）后cIAP1、cIAP2蛋白表达；F：荧光定量
PCR法检测过表达MVP后cIAP1的mRNA表达。两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001。
***
*
**
图3 MVP促进cIAP1的转录表达
Figure 3 MVP promoted cIAP1 transcriptional expression
A B Lenti⁃con C TNF⁃α - - - + + +
si⁃NC si⁃clAP1 Lenti⁃MVP si⁃cIAP1 - - + - - +
**
Lenti⁃MVP
Casapse3活性 （ % of Lenti⁃con） 150
cIAP1 62 kDa 100 ** cleaved Casapse 3 - + + - + + 17 kDa
GAPDH 37 kDa 50 Tubulin 55 kDa
0
TNF⁃α + + +
si⁃clAP1 - - +
D 150 Lenti⁃con E 1 000 AV 1 000 AV 1 000 AV
（ % of Lenti⁃con） 100 ** ** SSC⁃H 800 SSC⁃H 800 SSC⁃H 800
Lenti⁃MVP
27.1%
49.0%
54.6%
600
600
600
400
400
400
AV阳性 50 200 0 200 0 200 0
0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
TNF⁃α + + +
FL4⁃H FL4⁃H FL4⁃H
si⁃clAP1 - - +
TNF⁃α + + +
si⁃cIAP1 - - +
A：敲降cIAP1后检测cIAP1表达；B：流式细胞术检测过表达MVP同时敲降cIAP1后Caspase 3活性（n=3）；C：Western blot检测过表达MVP同
时敲降cIAP1后Caspase 3剪切体蛋白表达；D、E：流式细胞术检测过表达MVP同时敲降cIAP1后Annexin V阳性率（n=4）。两组比较，P < 0.01。
**
图4 cIAP1敲降逆转MVP过表达引起的HAEC凋亡抑制
Figure 4 cIAP1 knockdown reversed HAEC apoptosis inhibited by MVP overexpression
