Page 45 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第8期 薛佳佳，王艺颖，胡成秀，等. 穹窿主体蛋白通过上调干扰素调节因子2抑制动脉内皮细胞凋亡［J］.
2023年8月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（8）：1076-1084 ·1079 ·

A ** B shRNA⁃MVP E 1 000 Control PI 1 000 TNF⁃α PI
MVP mRNA水平 （ % of shRNA⁃sc） 150 MVP shRNA⁃sc 110 kDa shRNA⁃sc SSC⁃H 800 23.4% SSC⁃H 800 28.6%
100
600
600
50
0 β⁃actin 42 kDa 400 400
shRNA⁃sc shRNA⁃MVP 200 200
0 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
C D
shRNA⁃sc shRNA⁃sc FL2⁃H FL2⁃H
shRNA⁃sc） 150 ** ** shRNA⁃sc） 250 * * * 1 000 31.9% 1 000 39.5%
shRNA⁃MVP
shRNA⁃MVP
PI
PI
800
800
200
（ % of 100 （ % of 150 shRNA⁃MVP SSC⁃H 600 SSC⁃H 600
100
400
400
细胞增殖 50 0 PI阳性 50 0 200 200
0
Control
TNF⁃α
TNF⁃α
Control
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
FL2⁃H FL2⁃H
F ** G Lenti⁃con Lenti⁃MVP J 1 000 Control 1 000 PI
TNF⁃α
MVP mRNA水平 （ % of Lenti⁃con） 600 MVP 110 kDa Lenti⁃con SSC⁃H 800 10.2% SSC⁃H 800 15.7%
PI
400
600
600
200
0 β⁃actin 42 kDa 400 400
200
Lenti⁃con Lenti⁃MVP 200
0 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
H I
Lenti⁃con Lenti⁃con 1 000 PI 1 000 FL2⁃H
FL2⁃H
（ % of Lenti⁃con） 150 ** *** （ % of Lenti⁃con） 200 * * ** Lenti⁃MVP SSC⁃H 800 6.61% SSC⁃H 800 9.57%
Lenti⁃MVP
Lenti⁃MVP
PI
150
100
600
600
100
细胞增殖 50 0 PI阳性 50 0 400 400
200
200
0
Control
TNF⁃α
Control
TNF⁃α
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
FL2⁃H FL2⁃H
A、B：HAEC 感染 MVP 敲降慢病毒（shRNA⁃MVP）后，以定量 PCR（A）和 Western blot（B）验证 MVP 敲降效率（n=3），shRNA⁃sc 为空载体对
照；C：CCK⁃8法检测敲降MVP后HAEC增殖活性（n=4）；D、E：HAEC细胞经PI标记后，以流式细胞术检测细胞死亡率（n=4）的定量图（D）和流
式点状图代表图（E）；F、G：HAEC感染MVP过表达慢病毒（Lenti⁃MVP）后，以定量PCR（F）和Western blot（G）验证MVP过表达效率（n=3），Lenti⁃
con为空载体对照；H：CCK⁃8法检测过表达MVP后HAEC增殖活性（n=4）；I、J：HAEC细胞经PI标记后，以流式细胞术检测细胞死亡率（n=4）的
定量图（I）和流式点状图代表图（J）。两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001。
**
***
*
图1 MVP促进HAEC增殖和抑制HAEC死亡
Figure 1 MVP promoted HAEC proliferation and inhibited HAEC death
2H~J）。这些结果表明 MVP 抑制 TNF⁃α诱导的 图 3A），而过表达 MVP 抑制 TNF⁃α诱导的 Caspase
HAEC凋亡。 8 活性（P < 0.05，图 3B）。结果提示外源性凋亡通
2.3 MVP促进凋亡抑制蛋白cIAP1的转录表达 路参与了 MVP 敲降引起的 HAEC 凋亡。
本研究探究 MVP 与外源性凋亡之间的调控关 为了进一步探究机制，检测了Caspase 8通路相
系。流式细胞术结果显示，TNF⁃α可诱导外源性凋 关分子（包括 FADD、FLIP、RIP1、cIAP1/2、CYLD、
亡关键分子 Caspase 8 的活性增高（P < 0.01），敲降 TRADD、TNFR1 和 TRAF2）mRNA 表达水平。结果
MVP 增加 TNF⁃α诱导的 Caspase 8 活性（P < 0.001， 显示，凋亡抑制蛋白 cIAP1/2 的 mRNA 水平在敲降