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第44卷第10期 马 君，王 敏，陶梦圆，等. GLP⁃1/GIP双受体激动剂替西帕肽改善db/db小鼠代谢相关脂
2024年10月 肪性肝病［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（10）：1344-1352 ·1347 ·

150 V 低温电转移 40 min 将分离的蛋白质转移到 镜观察。
PVDF膜上，将PVDF膜浸入5%脱脂牛奶中封闭1 h， 1.2.8 RT⁃PCR检测
分别加入相应一抗，所有抗体均按照说明书稀释， 使用 TRIzol 试剂从肝组织中提取总 RNA。然
TM
4 ℃过夜，随后分别加入二抗室温孵育 1 h，采用超 后，依据逆转录试剂HiScript Ⅲ RT SuperMix for qPCR
敏ECL发光试剂盒曝光显影，应用Image J软件分析 说明书将组织RNA 逆转录为 cDNA。以 cDNA 为模
各条带灰度值。 板按下列条件进行 RT⁃PCR 反应，引物序列见表 1。
1.2.7 肾脏免疫组织化学（immunohistochemistry， 循环条件：95 ℃预变性30 s；95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s 共
IHC）检测 40 个循环；熔解曲线：95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，95 ℃
石蜡切片放入60 ℃烤箱中烘烤过夜，随后在二 15 s。以GAPDH作为内参基因，采用2 -ΔΔCT 相对定量
甲苯中浸泡2次，每次 15 min，然后将切片依次放入 法对各组 IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α、含有半胱天冬酶募集
不同浓度乙醇（95%、85%、75%），每次浸泡 2 min， 结构域的炎性体衔接子凋亡相关斑点样蛋白（apop⁃
PBS 溶液洗涤。抗原修复仪进行抗原修复，再次洗 tosis⁃associated speck⁃like protein containing a caspase
涤，随后滴加 3% H2O2，室温孵育 10 min，油性笔在 recruitment domain，ASC）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白
组织周围画圈，分别滴加 Fibronectin、IL⁃6 一抗，湿 酶 1（cysteine containing aspartate specific protease 1，

盒内 4 ℃孵育过夜，洗涤后滴加二抗，湿盒内 37 ℃ Caspase⁃1），以及Fibronectin、α⁃SMA、Col⁃Ⅰ、胶原蛋白
孵育1 h，再次洗涤后加入适量 DAB 显色液显色，显 Ⅳ（collagen Ⅳ，Col⁃Ⅳ）、转化生长因子（transforming
色效果满意时蒸馏水洗涤终止显色。将切片放入 growth factor，TGF）⁃β基因表达差异进行定量分析。
苏木素中 1 min后使用流水冲洗 2 min，随后浸入自 1.3 统计学方法
来水中返蓝 2 s，再次流水冲洗。返蓝后的切片依次 所有数据采用 GraphPad Prism 9.5.1 软件进行
放入不同浓度的乙醇中（分别为 75%、85%、95%）， 分析。数据均为计量资料，用均数±标准差（x ± s）表
每次 30 s。晾干，滴加中性树胶，盖玻片封片，显微 示。通过 t 检验分析两组之间的差异，两组以上比

表1 引物序列
Table 1 Primer sequences
Gene Forward（5′→3′） Reverse（5′→3′）
GAPDH CCATTTGCAGTGGCAAAG CACCCCATTTGATGTTAGTG
IL⁃1β TTCAGGCAGGCAGTATCACTC GAAGGTCCACGGGAAAGACAC
IL⁃6 GAGCCCACCAAGAACGATAG TTTCCACGATTTCCCAGAGA
TNF⁃α AGTCCGGGCAGGTCTACTTT TTGGACCCTGAGCCATAATC
ASC GACAGTGCAACTGCGAGAAG CGACTCCAGATAGTAGCTGACAA
Caspase⁃1 ACAAGGCACGGGACCTATG TCCCAGTCAGTCCTGGAAATG
Fibronectin CCTCAATCCAAATGCCTCT AACCTCTTCCCGAACCTTG
α⁃SMA ACTACTGCCGAGCGTGAGAT TCCATCCCAATGAAAGATGG
Col⁃Ⅰ GATGGATTCCCGTTCGAGTA TGCTGTAGGTGAAGCGACTG
Col⁃Ⅳ AACATCAACAACGTCTGCAA TGACTGTGTACCGCCATCAC
TGF⁃β GTGGAAATCAACGGGATCAG CGCACACAGCAGTTCTTCTC
较采用方差分析。P < 0.05为差异有统计学意义。 出现下降（P < 0.05），证实了利拉鲁肽与替西帕肽均
能改善 db/db 小鼠 FBG 及 HbA1c，调节糖代谢。与
2 结 果
Model 组小鼠相比，Liraglutide 组小鼠 FBG 下降了
2.1 各组小鼠糖代谢指标及体重比较 56%，HbA1c 下降了 32%，而 Tirzepatide 组小鼠 FBG
MAFLD 的发生发展与糖代谢异常和肥胖密切 下降了69%，HbA1c下降了40%。在体重方面，Model
相关，因此评估了利拉鲁肽与替西帕肽对小鼠 组小鼠体重明显高于 Control 组小鼠（P < 0.05，图
FBG、HbA1c及体重的影响。与Control组小鼠对比， 1C），与Model组相比，Liraglutide 组及Tirzepatide 组
Model 组小鼠 FBG 及 HbA1c 升高（P < 0.05，图 1A、 小鼠体重分别下降20%、30%。上述结果表明，替西
B），而经过药物干预后两组小鼠的FBG及HbA1c均 帕肽在调节糖代谢及控制体重方面优于利拉鲁肽。