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第44卷第10期         王薇雅，陶长锐，晁红颖，等. 三氧化二砷联合普纳替尼对白血病细胞KG⁃1的抑制效应［J］.
                 2024年10月                    南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（10）：1362-1368                      ·1363 ·


                with ATO or pratinib monotherapy（both P < 0.01）. Conclusion：ATO and ponatinib may inhibit KG⁃1 cell proliferation and colony
                formation and induce cell apoptosis through different mechanisms. The combination of the two drugs can further enhance the inhibitory
                effect on KG⁃1 cells.
               ［Key words］ arsenic trioxide；FGFR1；KG⁃1 cell；apoptosis
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2024，44（10）：1362⁃1368］



                    8p11 骨髓增殖综合征（8p11 myeloproliferative          FGFR1、Bcl⁃2、Bax、Caspase⁃3 抗体（Abcam 公司，美
                syndrome，EMS）是一种罕见的、与定位于8号染色体                     国）；HRP标记羊抗兔二抗（Jackson Immuno Research

                短臂的成纤维细胞生长因子受体1（fibroblast growth                 公司，美国）；ATO粉剂（北京双鹤制药股份有限公司）。
                factor receptor 1，FGFR1）基因易位相关的侵袭性血
                                                                                   表1 引物序列
                      ［1］
                液肿瘤 。2016 年被 WHO 归入伴嗜酸粒细胞增多                                  Table 1 Sequences of primers
                和PDGFRA、PDGFRB、FGFR1基因重排的髓系和淋
                                                                       Primer             Sequence（5’→3’）
                巴系肿瘤亚型中 。既往研究发现，EMS 患者往往                             FGFR1_F         ATCTGGCCTCCAAGAAGTGC
                              ［2］
                对常规化疗耐药，诊断 12 个月时约 46.2%的 EMS                        FGFR1_R         AAATAATGCCTCGGGTGCCA
                患者发生白血病转化，超过 50%的患者在 1 年内死                           Caspase3_F      TCTGGTTTTCGGTGGGTGTG
                 ［3］
                亡 。鉴于EMS极差的预后，针对FGFR1的靶向抑                            Caspase3_R      TGGTTCCCGCAAAACTCACT
                制剂成为近年研究的热点，其中，小分子酪氨酸激                               BCL2_F          TGAACTGGGGGAGGATTGTG
                酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor，TKI）普纳替尼              BCL2_R          CGTACAGTTCCACAAAGGCA
               （ponatinib）能够抑制下游信号通路的激活，延长                           BAX_F           GGGTTGTCGCCCTTTTCTAC
                                                                     BAX_R           CTGGAGACAGGGACATCAGT
                                                     ［5］
                                     ［4］
                EMS 模型小鼠的生存期 。Khodadoust 等 报道显
                                                                     GAPDH_F         AAGACGGGCGGAGAGAAACC
                示，1 例 FGFR1 重排阳性的杂合细胞白血病患者规
                                                                     GAPDH_R         CGTTGACTCCGACCTTCACC
                律口服单药普纳替尼12周后达到形态学缓解，但细
                胞遗传学显示仍有 29%阳性。三氧化二砷（arsenic                      1.2  方法
                trioxide，ATO）是我国最早用来治疗肿瘤的药物之                      1.2.1  细胞培养
                一，也是目前治疗急性早幼粒细胞白血病的一线                                 人白血病 KG⁃1 细胞株购自美国 ATCC。采用
                方案，鉴于其高效且无明显骨髓毒性，安全性及耐                            含有 20%热灭活胎牛血清的 IMDM 培养基，置于
                受性均较好，因此常与其他药物联合来治疗恶性                             37 ℃、5% CO2培养箱中培养，每2~3 d更换1次细胞
                肿瘤  ［6-7］ 。本研究通过体外实验探索 ATO 联合第 3                  培养基。实验所用细胞均处于对数生长期。
                代 TKI 普纳替尼对携带 FGFR1OP2⁃FGFR1 融合基                  1.2.2  CCK⁃8法检测单药及联合用药对细胞增殖的
                因的 KG⁃1 细胞株的抑制效应，以期为未来临床应                         影响
                用提供理论依据。                                              取对数生长期的 KG⁃1 细胞接种于 96 孔板，每
                                                                                          4
                                                                  孔 100 μL，细胞数为 2×10 个，分为对照组（DMSO
                1 材料和方法
                                                                  组）、ATO单药组、普纳替尼单药组、两药联合组，其
                1.1  材料                                           中单药组同时设置药物浓度梯度，ATO 浓度分别
                    普纳替尼（Selleck公司，美国）溶于 DMSO，-80 ℃               为：5、10、20、40、60、80、100 μg/mL；普纳替尼组浓度
                保存。IMDM培养基（Hyclone公司，美国），无支原体                     分别为：2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0 nmol/L。

                污染；胎牛血清（Gibco公司，美国）；TRIzol（Invitrogen             每组设 3 个复孔，在培养箱中培养48 h后，加入20 μL
                公司，美国）；实时荧光定量 PCR 试剂、逆转录试剂                        CCK⁃8 溶液，在培养箱内继续孵育 1 h，用酶标仪检
                盒（TaKaRa 公司，日本）；引物由上海英骏生物技术                       测 450 nm处各孔的吸光度，计算细胞增殖抑制率及
                有限公司合成，具体序列见表 1；CCK⁃8 试剂盒（合                       药物的半抑制浓度（inhibitory concentration 50，IC50），
                肥Biosharp生物技术公司）；AnnexinⅤ⁃FITC/PI凋亡               并以IC50作为后续细胞实验的给药剂量。

                检测试剂盒（BD 公司，美国）；β⁃actin 抗体（Santa                  1.2.3  RT⁃qPCR 检测凋亡相关基因及 FGFR1 基因
                Cruz公司，美国）；PI3K、p⁃PI3K、AKT、p⁃AKT、mTOR、            表达
                p⁃mTOR、STAT3/5、p⁃STAT3/5、MAPK、p⁃MAPK、                 实验分组同前，采用 TRIzol 法提取各组细胞总
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